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J-GLOBAL ID：201202223607637543   整理番号：12A0562990

酵素の動力学,及び阻害研究のためのキャピラリー内電気泳動法の新たな開発

New development in in-capillary electrophoresis techniques for kinetic and inhibition study of enzymes

著者 (5件)： NEHME Hala (Inst. de Chimie Organique et Analytique (ICOA), Univ. d’Orleans, CNRS FR 2708, UMR 7311, Orleans, FRA) ,  NEHME Reine (Inst. de Chimie Organique et Analytique (ICOA), Univ. d’Orleans, CNRS FR 2708, UMR 7311, Orleans, FRA) ,  LAFITE Pierre (Inst. de Chimie Organique et Analytique (ICOA), Univ. d’Orleans, CNRS FR 2708, UMR 7311, Orleans, FRA) ,  ROUTIER Sylvain (Inst. de Chimie Organique et Analytique (ICOA), Univ. d’Orleans, CNRS FR 2708, UMR 7311, Orleans, FRA) ,  MORIN Philippe (Inst. de Chimie Organique et Analytique (ICOA), Univ. d’Orleans, CNRS FR 2708, UMR 7311, Orleans, FRA)
資料名： Analytica Chimica Acta  (Analytica Chimica Acta)
巻： 722  ページ： 127-135  発行年： 2012年04月13日 
JST資料番号： A0394A  ISSN： 0003-2670  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 酵素は,しばしば,酵素活性の測定によって定量される。キャピラリー電気泳動法が,生物化学試験の小型化の動向のために,この分野でその地位を獲得しつつある。本研究の目的は,酵素活性の研究のためのプレキャピラリー(オフ-ライン)電気泳動とキャピラリー内電気泳動法を比較する。モデル酵素としてβ-ガラクトシダーゼ(β-Gal)を選んだ。それぞれの方法を検体の(数十ナノリットルまでの)消費の減少,(1分以下の)分析時間のために個別に最適化した。ピーク効率,分解能,及び繰り返し性に従って,いくつかの実験パラメーター(バックグランド電解質とインキュベーション緩衝液のイオン強度,インキュベーション時間,注入量等)を最適化した。それぞれの方法の性能をモニターするために,β-Galによる4-ニトロフェニル-D-ガラクトピラノシドの触媒定数と競合阻害剤2-ニトロフェニル-1-チオ-β-D-チオガラクトピラノシド(ONPTG)による阻害定数(K_iとIC₅₀)を決定した。得られた結果を相互に比べ,標準分光法との比較によっても評価した。電気泳動法が,試料の消費と速度の点で最もすぐれた方法であることが判明した。short-end注入が,電気泳動分析(<0.8min)のスピードアップに成功裏に利用された。この方法は,酵素阻害の研究の強力な手段である。通常,阻害剤は,同様の移動度を持つ基質と混合してキャピラリーに注入される。本研究で筆者らは,基質と阻害剤を予め混合せずに,酵素の阻害を可能にする方法をはじめて示す。この方法は,過剰の基質の消費を伴わない迅速な阻害剤のスクリーニングに非常に興味深い。Copyright 2012 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.

シソーラス用語： *酵素阻害 ,  *キャピラリー電気泳動 ,  *酵素反応速度論 ,  スクリーニング ,  β-ガラクトシダーゼ ,  微量分析

分類 (2件)： 生物物理的研究法  (EA03020V) ,  酵素一般  (EB09010D)

タイトルに関連する用語 (7件)： 酵素 ,  動力学 ,  阻害 ,  研究 ,  キャピラリー ,  電気泳動法 ,  開発