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J-GLOBAL ID：201202224042226230   整理番号：12A1295157

小分子を検出するための一本鎖DNA結合蛋白質支援蛍光偏光アプタマアッセイ

Single-Stranded DNA Binding Protein-Assisted Fluorescence Polarization Aptamer Assay for Detection of Small Molecules

著者 (6件)： ZHU Zhenyu (Univ. Grenoble I (Joseph Fourier), Grenoble, FRA) ,  RAVELET Corinne (Univ. Grenoble I (Joseph Fourier), Grenoble, FRA) ,  PERRIER Sandrine (Univ. Grenoble I (Joseph Fourier), Grenoble, FRA) ,  GUIEU Valerie (Univ. Grenoble I (Joseph Fourier), Grenoble, FRA) ,  FIORE Emmanuelle (Univ. Grenoble I (Joseph Fourier), Grenoble, FRA) ,  PEYRIN Eric (Univ. Grenoble I (Joseph Fourier), Grenoble, FRA)
資料名： Analytical Chemistry  (Analytical Chemistry)
巻： 84  号： 16  ページ： 7203-7211  発行年： 2012年08月21日 
JST資料番号： A0395A  ISSN： 0003-2700  CODEN： ANCHAM  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： アメリカ合衆国 (USA)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 蛍光偏光は薬物治療モニタリング,乱用薬物,毒性スクリーニングなど臨床化学において広く用いられる技法であり,蛍光偏光イムノアッセイの成功にもかかわらず,代替親和性ツールに蛍光偏光技法を組合わせる方法についての研究がなされている。現在,蛍光偏光アプタマアッセイによる蛋白質及び小分子被検質でのセンシングに最も多用される代替バインダは核酸アプタマである。本研究では強力なFP信号エンハンサツールとして大腸菌からの一本鎖DNA結合(SSB)蛋白質を用いる蛍光偏光アプタマアッセイ戦略を提案した。このアプローチはSSB蛋白質が遊離状態の核酸アプタマに結合する能力に依存するもので,モデル核酸として抗アデノシン-DNAアプタマ(Apt-A)を用いた。蛍光トレーサを設計するため,Apt-Aの異なる部位へふたつのフルオロホア(フルオレセイン及びテキサスレッド)を導入した。反応系に被検質を導入した時,Ade-Apt-A A複合体の折畳み三次構造形成が蛋白質からの標識化核酸の放出を誘起し,蛍光異方性に強い減少を生じた。競合置換モデルの開発によって蛍光異方性変化に関係する要因を考察し,抗アデノシンアッセイに最適のトレーサ候補を選択した。ここに提案したSSBベース競合置換戦略によってターゲットの小分子結合を検出できる蛍光偏光アプタマアッセイアプローチの特徴を明らかにした。

シソーラス用語： *バイオアッセイ ,  *偏光 ,  *蛍光 ,  *DNA【核酸】 ,  *DNA結合タンパク質 ,  *小分子 ,  検出法 ,  蛍光標識 ,  発色団 ,  三次構造 ,  折畳み構造 ,  異方性 ,  親和性 ,  性能評価 ,  キャリブレーション ,  プリンヌクレオシド ,  リボヌクレオシド ,  ラクトン ,  スピロ化合物 ,  フェノール類 ,  芳香族縮合化合物 ,  診断用薬
準シソーラス用語： *DNAアプタマー ,  フルオロホア ,  蛍光トレーサ ,  蛍光異方性 ,  *蛍光偏光法 ,  結合親和性 ,  *一本鎖DNA結合蛋白質

分類 (4件)： バイオアッセイ  (EA03060N) ,  偏光測定と偏光計  (BD07050K) ,  核酸一般  (EB04010U) ,  蛋白質・ペプチド一般  (EB03010N)

物質索引 (3件)： アデノシン ,  テキサスレッド ,  フルオレセイン

タイトルに関連する用語 (4件)： 小分子 ,  一本鎖DNA結合蛋白質 ,  支援 ,  蛍光偏光