文献

J-GLOBAL ID：201202234435772801   整理番号：12A0645238

配列特異的な切断モジュールを持つ新しい亜鉛フィンガーヌクレアーゼプラットフォーム

A novel zinc-finger nuclease platform with a sequence-specific cleavage module

著者 (6件)： SCHIERLING Benno (Justus-Liebig Univ., Giessen) ,  DANNEMANN Nadine (Hannover Medical School, Hannover, DEU) ,  GABSALILOW Lilia (Justus-Liebig Univ., Giessen) ,  WENDE Wolfgang (Justus-Liebig Univ., Giessen) ,  CATHOMEN Toni (Hannover Medical School, Hannover, DEU) ,  PINGOUD Alfred (Justus-Liebig Univ., Giessen)
資料名： Nucleic Acids Research  (Nucleic Acids Research)
巻： 40  号： 6  ページ： 2623-2638  発行年： 2012年03月30日 
JST資料番号： D0242C  ISSN： 0305-1048  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： イギリス (GBR)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 亜鉛フィンガーヌクレアーゼ(ZFN)は,結合ドメインを構成する亜鉛フィンガー(ZF)および切断モジュールを構成するFokIの非特異的DNA切断ドメインから成っている。ZFの代替としてTALE配列などの新しい結合モジュールが考えられてきたが,FokIの触媒ドメインを交換する試みはこれまで為されていない。本研究では,3種類のZFアレイと制限エンドヌクレアーゼPvuIIを融合させることにより,ZFNの代替品の作製を試みた。PvuIIをZFと組み合わせると特異性の追加エレメントが加わり,ZF-PvuII構築物は隣接ZF結合部位を持つPvuII部位のみが切断されるようにデザインされる必要があることから,K_mとk_catを変化させ,忠実度を増加させるようにPvuIIにアミノ酸置換を導入した。最適化したZF-PvuII融合構築物は,in vitroおよび細胞中で,アドレス指定された部位においてアドレス指定されていないPvuII部位よりも1000倍以上の選択性でDNAを切断した。類似したZF-FokIヌクレアーゼとは異なり,in vitroにおいて基質に対して過剰な酵素あるいは長いインキュベーション時間でも,アドレス指定されていない切断は誘導されなかった。以上より,ZF-PvuIIプラットフォームはZFNの有効な代替となることが示された。

シソーラス用語： *DNA制限酵素 ,  *融合タンパク質 ,  塩基対置換 ,  タンパク質工学 ,  *親和性 ,  濃度依存性 ,  基質特異性 ,  分子設計 ,  酵素反応速度論
準シソーラス用語： *亜鉛フィンガーヌクレアーゼ ,  PvuII ,  制限エンドヌクレアーゼ ,  アミノ酸置換 ,  *結合親和性 ,  塩濃度依存性

分類 (2件)： 酵素一般  (EB09010D) ,  核酸一般  (EB04010U)

タイトルに関連する用語 (3件)： モジュール ,  亜鉛フィンガーヌクレアーゼ ,  プラットフォーム