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J-GLOBAL ID：201202240907614580   整理番号：11A1733201

Eimeria tenellaマロニル-CoA:ACPトランスアシラーゼの活性に及ぼす種々の発現ベクターおよび温度の影響

Effects of Different Expression Vectors and Temperatures on the Activity of Eimeria tenella Malonyl-CoA:ACP Transacylase

著者 (8件)： Sun Mingfei (Inst. of Veterinary Medicine; Guangdong Acad. of Agricultural Sciences, Guangzhou) ,  Qin Zonghua (Inst. of Veterinary Medicine; Guangdong Acad. of Agricultural Sciences, Guangzhou) ,  Xie Mingquan (Inst. of Veterinary Medicine; Guangdong Acad. of Agricultural Sciences, Guangzhou) ,  Yuan Jianfeng (Inst. of Veterinary Medicine; Guangdong Acad. of Agricultural Sciences, Guangzhou) ,  Lv Minna (Inst. of Veterinary Medicine; Guangdong Acad. of Agricultural Sciences, Guangzhou) ,  Yu Jinshu (Inst. of Veterinary Medicine; Guangdong Acad. of Agricultural Sciences, Guangzhou) ,  Wu Caiyan (Inst. of Veterinary Medicine; Guangdong Acad. of Agricultural Sciences, Guangzhou) ,  Cai Jianping (Inst. of Veterinary Medicine; Guangdong Acad. of Agricultural Sciences, Guangzhou)
資料名： Xumu Shouyi Xuebao  (Xumu Shouyi Xuebao)
巻： 41  号： 9  ページ： 1158-1165  発行年： 2010年 
JST資料番号： C2231A  ISSN： 0366-6964  CODEN： CMHPAI  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 本研究の目的は,組換Eimeria tenellaマロニル-CoA:のACPトランスアシラーゼ(rEtMCAT)活性に及ぼす種々の発現ベクターおよび温度の影響を検討することである。テンプレートとして,バイオインフォマティック解析により予測したEtMCATをコード化するORF配列を用いて,3対のプライマーを設計し,次に示すフラグメントを増幅した:全ORF,N末端シグナルペプチドのないORF,N末端シグナルペプチドおよび遷移ペプチドのないORF。3つのクローン化フラグメントの各々は,それぞれ,3つのプラスミドベクター(pMAL-c2x,pET-32a(+)およびpProExHTa)を挿入していた。すべての組み換えベクターはE.coli(大腸菌)Rosseta(DE3)に形質移入され,それぞれ,種々の温度条件下(37,30および16°C)で,IPTGにより誘導された。rEtMCATの酵素活性を,a-ケトグルコン酸デヒドロゲナーゼ(KDH)-結合アッセイシステムを用いて,測定した。成熟ペプチド(すなわち,N末端シグナルペプチドおよび遷移ペプチドを切除したペプチド)をコード化しているORFだけが,3ベクターシステムにおいて発現でき,可溶性rEtMCATの高い含有量が,組換えプラスミドpMAL-c2x-mcatまたはpET-32a(+)mcatにおいてのみ,発現されることを,結果は明らかにした。そこで,それらの発現産物は同様な酵素活性を示した。低い培養温度(30および16°C)では,それらの発現を強化することができる。しかし,Rosseta(DE3)/pProExHTa-mcatにおいては,いかなる可溶性蛋白質も無かった。そして,再生後でさえ,封入体において発現される組換蛋白質は,均一な酵素活性を示さなかった。本試験(特にタグ蛋白質タイプ)で用いた発現ベクターのキャラクタリゼーションは,発現温度と同様に,E.coli(大腸菌)Rosseta(DE3)において発現されるrEtMCATの産生および酵素活性に顕著な影響を及ぼした。封入体において発現されたrEtMCATが,酵素分析のために使用できないことが,示唆された。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST

シソーラス用語： *Eimeria tenella ,  アシルトランスフェラーゼ ,  ベクター ,  温度 ,  プライマー【遺伝】 ,  シグナルペプチド ,  アシルCoA
準シソーラス用語： トランスアシラーゼ ,  発現ベクター ,  プラスミドベクター

分類 (1件)： 微生物学(ウイルス以外)一般  (EG03010C)

物質索引 (1件)： マロニル-CoA

タイトルに関連する用語 (6件)： Eimeria ,  マロニル-CoA ,  ACP ,  トランスアシラーゼ ,  活性 ,  発現ベクター