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J-GLOBAL ID：201202261899425362   整理番号：12A0962086

Pyrococcus furiosus COM1株の組換発生特性は標的変異株の迅速な選択を可能にする

Recombinogenic Properties of Pyrococcus furiosus Strain COM1 Enable Rapid Selection of Targeted Mutants

著者 (9件)： FARKAS Joel (Univ. Georgia, Georgia, USA) ,  STIRRETT Karen (Univ. Georgia, Georgia, USA) ,  LIPSCOMB Gina L. (Univ. Georgia, Georgia, USA) ,  NIXON William (Univ. Georgia, Georgia, USA) ,  NIXON William (Oak Ridge National Lab., Tennessee, USA) ,  SCOTT Robert A. (Univ. Georgia, Georgia, USA) ,  ADAMS Michael W.W. (Univ. Georgia, Georgia, USA) ,  ADAMS Michael W.W. (Oak Ridge National Lab., Tennessee, USA) ,  WESTPHELING Janet (Univ. Georgia, Georgia, USA)
資料名： Applied and Environmental Microbiology  (Applied and Environmental Microbiology)
巻： 78  号： 13  ページ： 4669-4676  発行年： 2012年07月 
JST資料番号： A0427A  ISSN： 0099-2240  CODEN： AEMIDF  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： アメリカ合衆国 (USA)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 高温性Pyrococcus furiosus COM1株は効率よくベクターやDNAを受容できる変異株で,遺伝子操作的形質転換と組換を組み合わせた頻度は線状DNAを用いた直接的な選択によるマーカーの置換を可能にする。組換効率の限界を調べる際に,標的領域に隣接する領域にホモロジーのある40ntでマーカー置換が可能で,この性質を利用してPCR産物から選択マーカーを切り出し,またはポップ-アウトして構築した欠失株を選択する戦略を考えた。COM1ΔpyrF変異株のtrpAB遺伝子座のマーカーレス欠失株を構築し,トリプトファン要求株であるJFW02株を得た。野生型のtrpAB対立遺伝子を含むプラスミドおよびゲノムDNAを原栄養性で選択することで,trpABを選択可能なマーカーに利用できることが明らかになった。radBの欠失株も構築したが,radBの欠失は組換えにも形質転換にもはっきりとした効果は無く,radB遺伝子産物はCOM1の表現型には関与していないことが示唆された。radAの欠失変異株の構築を試みたが成功しなかったので,radAは必須の遺伝子である可能性が示唆された。この手法により複数の変異株を迅速かつ容易に獲得でき,必須ではない遺伝子が欠失した変異株の構築が可能である。

シソーラス用語： 欠失突然変異 ,  *古細菌 ,  高温菌 ,  *形質転換 ,  *DNA組換 ,  バイオマーカー ,  栄養素要求性 ,  スクリーニング
準シソーラス用語： *Pyrococcus furiosus ,  *受容能

分類 (1件)： 遺伝子操作  (EC02050B)

タイトルに関連する用語 (5件)： Pyrococcus ,  株 ,  組換 ,  標的 ,  変異株