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J-GLOBAL ID：201202293334604190   整理番号：12A0277717

in vitroにおけるC型肝炎ウイルスNS3-4Aプロテアーゼ阻害剤のハイスループットスクリーニングモデルの確立と利用

Establishment and Application of High Throughput Screening Model for Hepatitis C Virus NS3-4A Protease Inhibitors in vitro

著者 (6件)： Li Jianrui (Dep. of Virology, Inst. of Medicinal Biotechnology, CAMS and PUMC, Beijing) ,  Wu Yanbin (Dep. of Virology, Inst. of Medicinal Biotechnology, CAMS and PUMC, Beijing) ,  Si Shuyi (Dep. of Virology, Inst. of Medicinal Biotechnology, CAMS and PUMC, Beijing) ,  Chen Hongshan (Dep. of Virology, Inst. of Medicinal Biotechnology, CAMS and PUMC, Beijing) ,  Jiang Jiandong (Dep. of Virology, Inst. of Medicinal Biotechnology, CAMS and PUMC, Beijing) ,  Peng Zonggen (Dep. of Virology, Inst. of Medicinal Biotechnology, CAMS and PUMC, Beijing)
資料名： Zhongguo Yixue Kexueyuan Xuebao  (Zhongguo Yixue Kexueyuan Xuebao)
巻： 33  号： 1  ページ： 98-101  発行年： 2011年 
JST資料番号： C2236A  ISSN： 1000-503X  CODEN： CIHPDR  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】in vitroにおいて,HCVに対するハイスループットスクリーニング阻害剤に対して,C型肝炎ウイルス(HCV)の非構造蛋白質3-4A(NS3-4A)セリンプロテアーゼの蛋白質分解活性を検出する蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)アッセイを確立する。【方法】HCV組換えプラスミドpMAL-C2/NS3-4AをE.coli菌株K_(12)TB_1に変換した。マルトース結合性蛋白質(MBP)NS3-4A融合蛋白質発現を,イソプロピル-β-D-チオガラクトピラノシド(IPTG)を加えて誘導し,アフィニティークロマトグラフィーにより精製した。MBP-NS3-4Aプロテアーゼの蛋白質分解活性を,特異的プロテアーゼ基質を有するFRETで分析した。このモデルの反応系を最適化し,モデルの信頼性を評価した。【結果】HCV NS3-4Aプロテアーゼ阻害剤に対するハイスループットスクリーニングモデルを確立し,酵素と基質の最良濃度を最適化した。モデルにおいて,プロテアーゼのkm値は4.74μmol/L,Z因子は最高0:80,そして変動係数(CV)は1.91%であった。既知のHCVプロテアーゼ阻害剤のひとつであるBILN2061を0.30nmol/LのKiで測定した。【結論】HCV NS3-4AセリンプロテアーゼにおけるFRET法を用いた分析モデルは,安定かつ信頼でき,モデルは,HCV NS3-4Aプロテアーゼ阻害剤に対するハイスループットスクリーニングに好適である。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST

シソーラス用語： *スクリーニング ,  プロテイナーゼ阻害剤 ,  C型肝炎ウイルス ,  アフィニティークロマトグラフィー ,  蛍光共鳴エネルギー移動 ,  セリンプロテイナーゼ ,  活性
準シソーラス用語： *ハイスループットスクリーニング ,  プロテアーゼ阻害剤 ,  セリンプロテアーゼ ,  蛋白質分解活性

分類 (1件)： 消化器の基礎医学  (GH01020E)

タイトルに関連する用語 (3件)： C型肝炎ウイルス ,  NS3 ,  プロテアーゼ阻害剤