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J-GLOBAL ID：201302241957235010   整理番号：13A0945290

液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析による生体組織におけるグローバルデオキシリボ核酸5-ヒドロキシメチルシトシンの分析

Analysis of global deoxyribonucleic acid 5-hydroxymethylcytosine in tissue by liquid chromatography-tandem mass spectrometry

著者 (4件)： Chen Liyu (Guangdong Medical Coll., Zhanjiang) ,  Zhang Lijian (Guangdong Medical Coll., Zhanjiang) ,  Zhang Liangtao (Guangdong Medical Coll., Zhanjiang) ,  Cai Chun (Guangdong Medical Coll., Zhanjiang)
資料名： Sepu  (Sepu)
巻： 30  号： 5  ページ： 533-537  発行年： 2012年 
JST資料番号： C2150A  ISSN： 1000-8713  CODEN： SEPUER  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： ターゲットシトシンのデオキシリボ核酸(DNA)メチル化トランスフェラーゼ1(Dnmt1)メチル化を防ぐ時,5-ヒドロキシメチルシトシンはDNAメチル化の変化をもたらす可能性がある。液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析(LC-MS/MS)を用いる生体組織におけるグローバルDNAヒドロキシメチル化の度の定量のための急速分析法を開発した。フェノール-クロロホルムで抽出後,140°Cで88%のギ酸により核酸塩基にDNAを加水分解し,窒素下で乾燥し,内標準としてシトシン-13C15N2を使った内標準法により追跡し,LC-MS/MSを使った解析のためにアセトニトリル-水(9:1,v/v)の混合物で再構成した。移動相として10mmol/lの酢酸アンモニウムおよびアセトニトリルを使った傾斜溶離法により,BEH HILICカラム(100mm×2.1mm,1.7μm)上でLC分離を実行した。質的で定量的検出を満たすために,マルチプル反応モニタリング(MRM)モードでの陽イオンエレクトロスプレイイオン化(ESI+)を使ったMS/MSにより検体を検出した。5-ヒドロキシメチルシトシンのための検量線の線形範囲が0.1-30ng/mlであることを結果は示し,相関係数は0.99を超えた。検出限界(LOD,S/N=3)および定量限界(LOQ,S/N=10)は,各々0.057および0.090ng/mlであった。日内のおよび日間精度は,各々5.13%および6.24%であった。スパイクされた標準回収率は,90.24%から97.53%へ変化した。ラットの大脳からDNAの解析に方法を施用し,5-ヒドロキシメチルシトシンの平均度は0.66%であった。本方法は簡単,再現性があり,高感度であるため,生体組織からのグローバルDNAにおける5-ヒドロキシメチルシトシンの定量分析に好適である。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST

シソーラス用語： *LC-MS分析 ,  *タンデム質量分析 ,  生体組織 ,  *DNA【核酸】 ,  メチル化 ,  傾斜溶離法 ,  エレクトロスプレイイオン化 ,  検出限界 ,  定量限界 ,  回収率
準シソーラス用語： *液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析 ,  *デオキシリボ核酸 ,  DNAメチル化

分類 (2件)： 液体クロマトグラフィー  (CC04014L) ,  質量分析  (CC03013N)

物質索引 (1件)： 5-ヒドロキシメチルシトシン

タイトルに関連する用語 (6件)： 液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析 ,  生体組織 ,  グローバル ,  デオキシリボ核酸 ,  5-ヒドロキシメチルシトシン ,  分析