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J-GLOBAL ID:201502208687150970   整理番号:15A0977790

単一ミトコンドリアにおける蛋白質コピー数の定量:Bcl-2ファミリー蛋白質

Quantification of protein copy number in single mitochondria: The Bcl-2 family proteins
著者 (9件):
資料名:
巻: 74  ページ: 476-482  発行年: 2015年12月15日 
JST資料番号: D0173C  ISSN: 0956-5663  資料種別: 逐次刊行物 (A)
記事区分: 原著論文  発行国: オランダ (NLD)  言語: 英語 (EN)
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ラボラトリー構築高感度フローサイトメーター(HSFCM)による免疫蛍光標識及び高感度検出を介した単一ミトコンドリア(Mt)における蛋白質コピー数及び分布を定量するための効果的方法を示した。HeLa細胞から単離したMtを,Bcl-2またはBaxを特異的に標的化するAlexa Flour488(AF488)標識モノクローナル抗体及び核酸染料を用いて染色した。対応可溶性蛍光色素(MESF)-AF488の分子のユニットにおいて較正した蛍光強度を持つ一連の蛍光ナノスフェアを用いて,単一Mtの免疫蛍光をそれに結合する抗体数及びMtあたりの蛋白質数に変換するための検量線を構築した。通常条件下で,計測した平均コピー数はBcl-2及びBaxに関してMtあたり各々1300及び220であった。蛋白質コピー数の顕著な変動を明らかにし,それはBcl-2に関して130~6000(2.5~97.5%)及びBaxに関して65~700(2.5~97.5%)に各々変動した。9hのアポトーシスシミュレーションに関してMtあたりBaxコピー数の約4.4倍増加を認めたが,Bcl-2の量はほとんど変わらなかった。これらの結果から,HSFCMに基づく免疫アッセイにより,単一Mtにおける蛋白質コピー数分布を測定する迅速/高感度法を提供することを示した。Copyright 2015 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.
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分類 (3件):
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バイオアッセイ  ,  蛋白質・ペプチド一般  ,  細胞構成体一般 
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