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J-GLOBAL ID：201502210232540944   整理番号：15A0803592

Pichia pastorisにおけるActinomadura sp.S14の耐熱性エステラーゼHydS14のクローニング,発現と特性化

Cloning, Expression and Characterization of a Thermostable Esterase HydS14 from Actinomadura sp. Strain S14 in Pichia pastoris

著者 (5件)： SRIYAPAI Pichapak (Srinakharinwirot Univ., Bangkok, THA) ,  KAWAI Fusako (Kyoto Inst. of Technol., Kyoto, JPN) ,  SIRIPOKE Somjai (Srinakharinwirot Univ., Bangkok, THA) ,  CHANSIRI Kosum (Srinakharinwirot Univ., Bangkok, THA) ,  SRIYAPAI Thayat (Srinakharinwirot Univ., Bangkok, THA)
資料名： International Journal of Molecular Sciences (Web)  (International Journal of Molecular Sciences (Web))
巻： 16  号： 6  ページ： 13579-13594 (WEB ONLY)  発行年： 2015年06月 
JST資料番号： U7038A  ISSN： 1422-0067  CODEN： IJMCFK  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 短報  発行国： スイス (CHE)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 熱安定性エステラーゼ遺伝子(hydS14)をActinomadura sp.からクローニングした。その遺伝子は777bpの長さで,シグナルペプチド及びN-グリコシル化部位がない,予測分子量26604Daの258アミノ酸残基のポリペプチドをコードしていた。コード蛋白質は,エステラーゼ/リパーゼスーパーファミリーのペンタペプチドモチーフ(GYSLG)と触媒三残基(Ser88-Asp208-His235)を含んでいた。HydS14配列は放線菌の23配列(23α/βヒドロラーゼ)と46%~64%の同一性を示し,3つの保存領域を有し,α/βヒドロラーゼ構造スーパーファミリーの他クラスタから区別される新規モチーフ(GY(F)SLG)を含んでいた。コード領域を含むプラスミド(pPICZαA-hydS14)を用いて,HydS14をAOXIプロモーター調節下にPichia pastorisで発現させた。上清から収集した組換HydS14の分子量は約30kDaで,N-グリコシル化なしの予測分子量と一致した。最適温度は約70°C,最適pHは8.0であった。50と60°Cで120分間安定であり,それぞれの残存活性は80%と90%以上であった。さらに,6.0~8.0と9.0のpHにおける活性は50%であった。酵素はp-ニトロフェニル-C2とC4に対して高い活性を示した。p-ニトロフェニル-C4に対するK_mとV_max値は0.21±0.02mMと37.07±1.04μmol/min/mgであった。酵素は短鎖のp-ニトロフェニルエステル(C2~C6)に活性であり,p-ニトロフェニル-C4が最適活性(K_cat/K_m=11.74mM^-1・S^-1)を示した。要約すると,HydS14はクローン化され,Pichia pastorisで初めて発現されたActinomadura sp.S14の耐熱性エステラーゼである。(翻訳著者抄録)

シソーラス用語： *エステル結合ヒドロラーゼ ,  酵素 ,  Actinomadura ,  *組換タンパク質 ,  Pichia ,  遺伝子クローニング ,  アミノ酸配列 ,  遺伝子発現 ,  系統樹 ,  温度依存性 ,  pH依存性 ,  経時変化 ,  酵素反応速度論 ,  基質特異性 ,  *酵素反応
準シソーラス用語： Pichia pastoris ,  耐熱性酵素 ,  微生物酵素

分類 (2件)： 酵素一般  (EB09010D) ,  微生物の生化学  (EG03020N)

物質索引 (1件)： p-ニトロフェニルブチラート

タイトルに関連する用語 (7件)： Pichia ,  Actinomadura ,  耐熱性 ,  エステラーゼ ,  クローニング ,  発現 ,  特性化