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J-GLOBAL ID：201502216102534185   整理番号：15A1123277

Hucho taimenインシュリン様成長因子-IIの原核生物発現と生物活性分析【Powered by NICT】

Prokaryotic expression and bioactivity analysis of Hucho taimen insulin-like growth factor-II

著者 (7件)： Wu Xiumei (Heilongjiang River Fisheries Res. Inst., Chinese Acad. of Fishery Sciences, Harbin) ,  Xu Liming (Heilongjiang River Fisheries Res. Inst., Chinese Acad. of Fishery Sciences, Harbin) ,  Zhao Jingzhuang (Heilongjiang River Fisheries Res. Inst., Chinese Acad. of Fishery Sciences, Harbin) ,  Liu Miao (Heilongjiang River Fisheries Res. Inst., Chinese Acad. of Fishery Sciences, Harbin) ,  Cao Yongsheng (Heilongjiang River Fisheries Res. Inst., Chinese Acad. of Fishery Sciences, Harbin) ,  Lu Tongyan (Heilongjiang River Fisheries Res. Inst., Chinese Acad. of Fishery Sciences, Harbin) ,  Yin Jiasheng (Heilongjiang River Fisheries Res. Inst., Chinese Acad. of Fishery Sciences, Harbin)
資料名： Zhongguo Shuichan Kexue  (Zhongguo Shuichan Kexue)
巻： 22  号： 2  ページ： 243-249  発行年： 2015年 
JST資料番号： C2255A  ISSN： 1005-8737  CODEN： ZSKEFS  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 魚類インシュリン様成長因子-II(IGF-II)は胚の発生に重要な役割を果たしている。著者らの目的は,Hucho taimen IGF-IIを分離し,特性化した。プライマーはサケIGF-II遺伝子配列に基づいて設計した。テンプレートとして用いたH.イトウ肝臓のRNA抽出物,IGF-II遺伝子のオープンリーディングフレームはワンステップRT-PCRにより増幅した。IGF-II遺伝子はpSUMOベクターに挿入し,発現ベクターを構築した。組換えベクターは標的蛋白質の発現を誘導するE.coli Rosettaに変換した。SDS-PAGE分析は,~40kDの期待されるサイズと明確な標的バンドを明らかにし,組換蛋白質は主に封入体の形であった。純ターゲット核融合蛋白質は封入の変性と再生によって得られた。精製IGF-IIはNi~(2+)-NTAカラム上でSUMOプロテアーゼと分離による消化後の融合蛋白質から得られた。ELISAおよびMTTアッセイは,標的蛋白質の免疫学的および生物学的活性を定量化するために使用した。標的蛋白質は抗原濃度に依存して市販ウサギ抗サケマスIGF-II抗体と特異的に反応することができる。単離IGF-II蛋白質は優れた免疫原性を有していた。MTTアッセイは,Epitheliaoma papulosum cyprini細胞(EPC)とニジマス生殖腺(RTG-2)細胞の増殖に及ぼすIGF-II蛋白質の影響を測定するために用いた。発現H.イトウIGF-II蛋白質はEPCとRTG-2細胞増殖を刺激することができる。原核生物系で発現したH.イトウIGF-II蛋白質は良好な生物活性を示した。要約すると,肝臓組織からH.イトウIGF-IIのcDNAをクローン化し,原核生物発現に使われるプラスミドpSUMO IGFを構築した。プラスミドはE.coli細菌におけるIGF-IIのIPTG誘導と発現に適している。プラスミドpSUMOはSUMOタグ,発現のレベルと標的蛋白質の安定性を向上させることができるを含んでいた。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【Powered by NICT】

シソーラス用語： ベクター ,  鋳型【遺伝】 ,  胚 ,  クローン ,  IGF2 ,  封入体 ,  RT-PCR法 ,  SDS-PAGE ,  *プラスミド ,  キャラクタリゼーション ,  ガラクトシド ,  チオ糖 ,  ピラノシド ,  有機硫黄化合物
準シソーラス用語： MTT法 ,  発現ベクター ,  オープンリーディングフレーム ,  遺伝子配列 , 【Automatic Indexing@JST】

分類 (2件)： 魚類  (FH02020K) ,  細菌による動物の伝染病  (FE02023A)

物質索引 (1件)： イソプロピルチオガラクトシド

タイトルに関連する用語 (4件)： インシュリン様成長因子 ,  原核生物発現 ,  生物活性 ,  分析