文献

J-GLOBAL ID：201502217481489708   整理番号：15A1398517

PAM認識の改変による黄色ブドウ球菌CRISPR-Cas9の標的範囲の拡大

Broadening the targeting range of Staphylococcus aureus CRISPR-Cas9 by modifying PAM recognition

著者 (10件)： KLEINSTIVER Benjamin P (Massachusetts General Hospital, Massachusetts, USA) ,  PREW Michelle S (Massachusetts General Hospital, Massachusetts, USA) ,  TSAI Shengdar Q (Massachusetts General Hospital, Massachusetts, USA) ,  NGUYEN Nhu T (Massachusetts General Hospital, Massachusetts, USA) ,  TOPKAR Ved V (Massachusetts General Hospital, Massachusetts, USA) ,  JOUNG J Keith (Massachusetts General Hospital, Massachusetts, USA) ,  KLEINSTIVER Benjamin P (Harvard Medical School, Massachusetts, USA) ,  TSAI Shengdar Q (Harvard Medical School, Massachusetts, USA) ,  JOUNG J Keith (Harvard Medical School, Massachusetts, USA) ,  ZHENG Zongli (City Univ. Hong Kong, Hong Kong, CHN)
資料名： Nature Biotechnology  (Nature Biotechnology)
巻： 33  号： 12  ページ： 1293-1298  発行年： 2015年12月 
JST資料番号： H0870A  ISSN： 1087-0156  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 短報  発行国： アメリカ合衆国 (USA)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： CRISPR-Cas9ヌクレアーゼはガイドRNAを利用して特定のDNA配列に作用するが,Cas9タンパク質によるPAM(protospacer adjacent motif)の認識も必要である。潜在的には,PAMが長いほどゲノム編集の特異性を向上させることができるが,Cas9オルソログが作用可能な配列の範囲が制限される。この制約を緩和する方法として,Cas9のPAM認識特異性を緩めることが考えられる。今回我々は,分子進化法を利用して黄色ブドウ球菌のCas9(SaCas9)のPAM(NNGRRT)を改変した。我々が発見したKKH SaCas9という変異体は,PAMがNN<span style=text-decoration:overline>N_</span>RRTの内在性ヒト標的部位で強力なゲノム編集活性を示し,SaCas9の標的範囲を約2~4倍に増加させた。GUIDE-seqにより,野生型およびKKH SaCas9がヒト細胞で誘導するオフターゲット効果はほぼ同数であることが明らかにされた。PAMの特異性を進化させる我々の方法は構造情報を必要としないため,さまざまなCas9オルソログに適用可能と考えられる。Copyright Nature Publishing Group 2015

シソーラス用語： *ヌクレオチド配列 ,  *黄色ぶどう球菌 ,  *ヌクレアーゼ ,  *突然変異体 ,  分子認識 ,  パリンドローム ,  RNA【核酸】 ,  RNAエディティング ,  DNA【核酸】 ,  選択性 ,  遺伝子 ,  ヒト ,  培養細胞 ,  遺伝学実験技術 ,  分子進化 ,  野生型 ,  酵素活性化 ,  核酸塩基
準シソーラス用語： CRISPR ,  *CRISPR-Cas9システム ,  GUIDE-seq. ,  *KKHSaCas9ヌクレアーゼ ,  *PAM配列 ,  オルソロガス遺伝子 ,  ガイドRNA ,  ゲノム編集

分類 (3件)： 酵素生理  (EG03052C) ,  酵素一般  (EB09010D) ,  遺伝子発現  (EC02040Q)

タイトルに関連する用語 (6件)： PAM ,  改変 ,  黄色ブドウ球菌 ,  CRISPR-Cas9 ,  標的 ,  拡大