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J-GLOBAL ID：201502217739167254   整理番号：14A1242142

ウシ及び組換えアデノウイルスベクターの構築における有効SREBP1shRNAの選択【Powered by NICT】

Selection of Effective SREBP1 shRNA in Cattle and the Construction of Recombinant Adenovirus Vector

著者 (9件)： Fu Changzhen (Coll. of Animal Sci. and Technol., Northwest A&F Univ., Shaanxi, Yangling) ,  Zan Linsen (Coll. of Animal Sci. and Technol., Northwest A&F Univ., Shaanxi, Yangling) ,  Wang Hong (Coll. of Animal Sci. and Technol., Northwest A&F Univ., Shaanxi, Yangling) ,  Cheng Gong (Coll. of Animal Sci. and Technol., Northwest A&F Univ., Shaanxi, Yangling) ,  Wang Hongbao (Coll. of Animal Sci. and Technol., Northwest A&F Univ., Shaanxi, Yangling) ,  Li Yaokun (Coll. of Animal Sci. and Technol., Northwest A&F Univ., Shaanxi, Yangling) ,  Jiang Bijie (Coll. of Animal Sci. and Technol., Northwest A&F Univ., Shaanxi, Yangling) ,  Gao Jianbin (Coll. of Animal Sci. and Technol., Northwest A&F Univ., Shaanxi, Yangling) ,  Yang Ning (Coll. of Animal Sci. and Technol., Northwest A&F Univ., Shaanxi, Yangling)
資料名： Zhongguo Nongye Kexue  (Zhongguo Nongye Kexue)
巻： 46  号： 23  ページ： 5026-5036  発行年： 2013年 
JST資料番号： W1459A  ISSN： 0578-1752  CODEN： CKNYAR  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： [目的]本研究の目的は,NotIウシステロール調節要素結合蛋白質1(SREBP1)遺伝子発現を妨害し,細胞レベルでのSREBP1遺伝子の機能と機構を研究するための基礎を提供することのみできる有効な小ヘアピンRNA(shRNA)を保有する組換アデノウイルスを構築した。〔方法〕SREBP1遺伝子のコーディング配列(CDS)領域によれば,6対の阻害shRNAと陰性対照shRNAの1対を設計し,pentr u6shRNA発現ベクターを構築するpentr-u6に挿入した。発現ベクターpsicheck iicarrying SREBP1および得られたpentr u6shRNAのトランスフェクションは,効率的なshRNAを選択する293A細胞系で行った。効率的なshRNAおよびshRNA ncたpad/bl DeSTに接続した組換えプラスミドを構築した。得られた組換アデノウイルスベクターはパッケージに293A細胞にトランスフェクトした。次に,アデノウイルスを増幅し,収穫した。リアルタイムPCR(qRT-PCR)はウシの前脂肪細胞において標的遺伝子SREBP1に収穫したアデノウイルスの干渉効果を検出し,確認した。ウイルス力価は,GFP標識法により決定した。[結果]結果は,shRNA,1053は87.4%SREBP1の発現を有意に減少させることを示した。shRNA,1053およびshRNA ncを持つ線形化組換えアデノウイルスベクターは293A細胞をトランスフェクトし,さらに包装及び増幅高力価組換えアデノウイルスAd,1053およびAdNC(7×10~8gfu/mlおよび9×10~8gfu/ml)であった。qRT-PCRの結果から,ウシの前脂肪細胞(干渉効率>85%)でSREBP1遺伝子のAd,1053有意にダウンレギュレートされたmRNA発現レベルを明らかにし,AdNCはしなかった。[結論]本研究では,組換えアデノウイルス,ウシSREBP1遺伝子のRNA干渉研究のために設計された効率的なshRNAを運ぶを成功裏に構築した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【Powered by NICT】

シソーラス用語： *ウシ ,  PCR法 ,  標識法 ,  緑色蛍光タンパク質 ,  *アデノウイルス科 ,  プラスミド ,  トランスフェクション ,  符号化 ,  *RNA【核酸】 ,  遺伝子 ,  遺伝子発現 ,  *組換 ,  RNA干渉
準シソーラス用語： *低分子ヘアピンRNA ,  mRNA発現 , 【Automatic Indexing@JST】

分類 (2件)： 分子遺伝学一般  (EC02010J) ,  ウイルスによる動物の伝染病  (FE02024R)

タイトルに関連する用語 (4件)： ウシ ,  組換えアデノウイルス ,  ベクター ,  構築