安定的トランスフェクトした再生肝-1ラット肝細胞癌細胞株のホスファターゼの確立とH uh7細胞における生物学的機能【Powered by NICT】

Jin Shaowen; Wang Kaimei; Xu Kang; Xu Junyao; Chu Zhonghua; Wang Jie

文献

J-GLOBAL ID：201502219600715684 整理番号：15A1118392

安定的トランスフェクトした再生肝-1ラット肝細胞癌細胞株のホスファターゼの確立とH uh7細胞における生物学的機能【Powered by NICT】

Establishment of phosphatase of regenerating liver -1 stably - transfected HCC cell lines and the biological functions in Huh7 cells

出版者サイト複写サービスで全文入手
高度な検索・分析はJDreamⅢで

著者 (6件)： , , , , ,
資料名：
巻： 32 号： 2 ページ： 302-305 発行年： 2015年
JST資料番号： C2337A ISSN： 1001-9030 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：中国 (CHN) 言語：中国語 (ZH)

客観的再生肝-1( PRL - 1)真核生物発現ベクターのホスファターゼを構築するために,安定-トランスフェクトしたHuh7細胞株を確立し,Huh7細胞におけるPRL-1の生物学的機能を調べた。方法はPRL-1のコード配列(CDS)フラグメントは,逆転写酵素-ポリメラーゼ連鎖反応( RT - PCR)により増幅した。BgiII/XhoI制限部位は標的フラグメントの側面に導入した。pMSCV-血球凝集素( HA)-PRL-1ベクターはpMSCV-PIGプラスミドに標的フラグメントをクローニングにより構築した。PCRとDNA配列決定検証組換えプラスミドを構築することに成功した。Huh7細胞を293T細胞を用いて包装したレトロウイルス上清による感染させた。感染後,細胞は2週間1mg/Lプロマイシンで選択した。Huh7細胞におけるPRL-1の発現を蛍光顕微鏡,フローcy tomety,実時間蛍光定量的ポリメラーゼ連鎖反応( FQ - PCR)とウェスタンブロット法で検出された。Huh7細胞におけるPRL-1の生物学的機能は,細胞計数キット-8(CCK - 8)アッセイ,板コロニー形成アッセイとトランスウェル浸潤アッセイにより調べた。結果はDNA配列決定をpMSCV-PIGベクターに挿入し標的断片は厳密に正しい実証した。蛍光顕微鏡とフローサイトメトリーは安定に示したトランスフェクト効率は90%以上であった。FQ-PCRアッセイ過剰発現群におけるPRL-1のmRNAレベルは対照群(P < 0. 05)のそれと比較して(4. 4 ± 1.5)倍であった。ウェスタンブロットアッセイPRL-1が外因的にHuh7細胞で過剰発現した。対照細胞と比較して,増殖速度はPRL-1安定トランスフェクトした細胞で増加した(P <0. 01)。コロニー形成効率はPRL-1安定トランスフェクト細胞[(26. 7 ± 1.9)%対(7. 3 ± 0. 8)%,P<0)01]で高く,過剰発現群ははるかに強い浸潤能(P < 0. 01)を有していた。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【Powered by NICT】

, , , , , , , , , , , ,
, , , , , , , , 【Automatic Indexing@JST】

腫ようの化学・生化学・病理学

, , , , , ,

前のページに戻る