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J-GLOBAL ID:201502219791044806   整理番号:15A1123274

インシュリン様成長因子の原核生物発現と生物活性分析Platichthys stellatusからII【Powered by NICT】

Prokaryotic expression and bioactivity analysis of insulin-like growth factor -II from Platichthys stellatus
著者 (5件):
資料名:
巻: 22  号:ページ: 214-223  発行年: 2015年 
JST資料番号: C2255A  ISSN: 1005-8737  CODEN: ZSKEFS  資料種別: 逐次刊行物 (A)
記事区分: 原著論文  発行国: 中国 (CHN)  言語: 中国語 (ZH)
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Platichthys stellatusは果肉の望ましい味及び塩分と温度への広い耐性のために高値カレイ種である。は近年の中国における経済的に重要な養殖海産魚になっている。インシュリン様成長因子(IGF)-IIは硬骨魚の成長と発育の調節において重要な役割を果たしている。著者らの目的は,P.stellatusにおけるIGF-IIの生理的機能を評価することであった。P.stellatusからIGF-II遺伝子の成熟ペプチドドメインをコードするcDNA配列をRT-PCR増幅を用いて単離した。対のプライマーは,カレイ目,スズキ目種からのIGF-IIの保存された配列に基づいて設計した。210bp断片は成熟ペプチドフラグメントとして得て,検証した。相同性比較はB,A,及びP.stellatus IGF-IIのD-ドメイン成熟ペプチドは,脊椎動物の中で,がC-ドメインの変化と高度に保存されていることを明らかにした。成熟ペプチド断片は対のプライマーとエンドヌクレアーゼBamHI,Hind IIIを用いたRT-PCRによって再構成された,T4DNAポリメラーゼによる原核生物発現ベクターpET-28aにサブクローニングしIGF II/pET28a組換えプラスミドを構築に成功した。N末端にHis6を含む特殊な融合ポリペプチドとIPTGによる誘導後の組換えIGF-IIプラスミドをE.coli BL21(DE3)において高度に発現した。SDS-PAGE分析は,IGF-IIポリペプチドは分子量11.4kDの封入体の形で発現し,37°Cで1.0mmol/LのIPTGによる全細菌蛋白質6時間誘導後の42.7%を占めることを示した。ウェスタンブロット分析は融合ポリペプチドは一次抗体(マウス抗His6モノクローナル抗体)及び二次抗体(セイヨウワサビペルオキシダーゼで標識したヤギ抗マウスIgG)とHis6抗体に抗原性を示した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【Powered by NICT】
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