Streptomycesにおける一段階高効率CRISPR/Cas9媒介ゲノム編集【Powered by NICT】

Huang He; Zheng Guosong; Jiang Weihong; Hu Haifeng; Lu Yinhua

文献

J-GLOBAL ID：201502220822679137 整理番号：15A1125573

Streptomycesにおける一段階高効率CRISPR/Cas9媒介ゲノム編集【Powered by NICT】

One-step high-efficiency CRISPR/Cas9-mediated genome editing in Streptomyces

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巻： 47 号： 4 ページ： 231-243 発行年： 2015年
JST資料番号： C2551A ISSN： 1672-9145 CODEN： ABBSC2 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：オーストラリア (AUS) 言語：英語 (EN)

RNA誘導DNA編集技術CRISPR(クラスター化規則的スペース間短パリンドローム反復)/Cas9はゲノムに二本鎖切断を導入し,その後の部位特異的挿入/欠失または細菌の遺伝物質の置換を指示するために使用されてきた,大腸菌,肺炎球菌,及びLactobacillus reuteriのような。本研究では,Streptomyces遺伝子操作における使用のための高効率CRISPR/Cas9ゲノム編集プラスミドpKCcas9dO,標的特異的ガイドRNA,コドン最適化cas9,および二相同性指示修復鋳型から成るを確立した。モデル株Streptomyces coelicolorM145にpKCcas9dO系列編集プラスミドを送達することにより,一段階属間移動を通して,著者らは,60%~-100%の高い効率で異なるレベルでゲノム編集,単一遺伝子欠失,actII-orf4,redD,glnRのような単一大型遺伝子クラスター欠失を含む,アクチノロジン(ACT)の抗生物質生合成クラスター(21.3 kb),ウンデシルプロジギオシン(RED)(31.6 kb),Ca~(2+)依存性抗生物質(82.8 kb)などを達成した。さらに,actII-orf4およびredDの同時欠失,および54%と45%の高い効率を持つACTとRED生合成遺伝子クラスターを実現した。最後に,rpsL遺伝子,ストレプトマイシンに対する耐性を持つ変異体を付与するへのヌクレオチドの点突然変異を導入するためにこのシステムを適用した。注目すべきことに,このシステムを用いて,1ラウンドゲノム修飾のに必要な時間は,従来の方法の場合の三分の1または1/2に減少した。これらの結果は,確立されたCRISPR/Cas9ゲノム編集システムはStreptomycesにおける現在の既存の方法と比較してゲノム編集効率を大幅に改善することを明確に示し,それは他の放線菌種におけるゲノム修飾への応用のための有望である。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【Powered by NICT】

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細胞構成体一般 , 遺伝子の構造と化学

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