ID1の発現および内皮前駆細胞の成長と増殖に対するE2-2とその効果のアデノウイルスベクターの構築【Powered by NICT】

Liu Xiaoli; Yang Haijie; Su Yong; Tan Zhisheng; Zhu Qin; Wang Hong

文献

J-GLOBAL ID：201502220844992793 整理番号：15A0099070

ID1の発現および内皮前駆細胞の成長と増殖に対するE2-2とその効果のアデノウイルスベクターの構築【Powered by NICT】

Construction of adenovirus vector of E2-2 and its effects on expression of ID1, and growth and proliferation in endothelial progenitor cells

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資料名：
巻： 36 号： 16 ページ： 1664-1669 発行年： 2014年
JST資料番号： C2217A ISSN： 1000-5404 CODEN： DYXUE8 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：中国 (CHN) 言語：中国語 (ZH)

転写因子E2-2遺伝子のアデノウイルスベクターを構築し,E2-2遺伝子を有するアデノウイルスベクターは,内皮前駆体細胞(EPC)におけるDNA結合/分化(ID1)の阻害剤の発現に影響を及ぼすかどうかを検討すること。方法マウスEPC骨髄を分離し,培養し,同定されたマウスE2-2遺伝子をコードするcDNA断片を逆転写酵素-ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)により増幅した。組換えプラスミドpAdTrack/E2-2,アデノウイルスバックボーンベクターAdeasy Iと再結合した組換えアデノウイルスプラスミドAd/E2-2を生成するhomologouslyを構築するためにPCR増幅断片は最初pTG19Tベクターにクローン化し,次にシャトルベクターpAdTrack CMV中にサブクローニングした。組換体アデノウイルスAd/E2-2は293細胞への組換アデノウイルスDNAをトランスフェクトすることにより生成し,次にEPCに感染するために採用した。トランスフェクトEPCで増強緑色蛍光蛋白質(EGFP)の発現をインバート顕微鏡で観察した。トランスフェクトEPCの成長と増殖は細胞カウントKit-8(CCK-8)により試験し,トランスフェクトEPCにおけるE2-2とID1の発現は各々RT-PCR法およびウェスタンブロット法により検討し,ID1の発現は半定量。骨髄の結果マウスEPCを分離し,培養し,同定した。マウスE2-2遺伝子をクローニングすることに成功した。感染能力を有するアデノウイルスウイルス粒子はAd/E2-2から生産された。CCK-8の結果は,E2-2を過剰発現し,EPCの増殖と増殖は後トランスフェクション(P<0.01)48Hから対照細胞より遅かった,特にことを実証した。RT-PCR,ウエスタンブロットおよび定量分析の結果は,対照細胞(P<0.01)と比較した場合,E2-2はEPCにおけるID1の発現をダウンレギュレートすることを明らかにした。結論はE2-2の組換えアデノウイルスベクターを成功裏に構築した。E2-2遺伝子を含むベクターは成長と増殖からEPCを防止し,細胞におけるID1の発現をダウンレギュレーションした。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【Powered by NICT】

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腫ようの化学・生化学・病理学 , 細胞生理一般 , 分子遺伝学一般

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