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J-GLOBAL ID:201502221049434860   整理番号:15A1123958

ラットRGC32プロモータの構築とMZF1との結合配列の同定【Powered by NICT】

Construction of rat RGC32 promoter and identification of its binding sequence with MZF1
著者 (7件):
資料名:
巻: 35  号:ページ: 143-148  発行年: 2015年 
JST資料番号: C2600A  ISSN: 1007-4368  CODEN: NAYXEW  資料種別: 逐次刊行物 (A)
記事区分: 原著論文  発行国: 中国 (CHN)  言語: 中国語 (ZH)
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【目的】は32(RGC32)遺伝子を補完し,骨髄亜鉛フィンガー遺伝子1(MZF1)の過剰発現に応答したHEK293細胞におけるそれらの活性を検出し,MZF1の可能な結合部位のスクリーニングに対するラット応答遺伝子の完全長および切断型プロモーターのルシフェラーゼレポータープラスミドを構築した。【方法】ラットRGC32プロモーター(-686~-1 nt)をPCRにより増幅し,ルシフェラーゼレポータープラスミド(pGL3-塩基酸)にクローン化した。組換プラスミド(pGL3-RGC32-FL)とラットMZF1発現プラスミド(pIRES2-EGFP-MZF1)はHEK-293細胞に共トランスフェクトし,続いてルシフェラーゼ活性はRGC32遺伝子転写におけるMZF1の役割を決定するために検出された。RGC32プロモーター内の潜在的MZF1結合部位を,分子生物学ソフトウェアによって予測した。予測された結果に基づいて,pGL3RGC32,pGL3RGC32とpGL3RGC32IIIと名付けた切断MZF1遺伝子プロモーターの異なるルシフェラーゼレポータープラスミドを構築した。pGL3RGC32FLまたはpGL3RGC32,pGL3RGC32 2,pGL3RGC32とpIRES2EGFP MZF1のプラスミドのプロモータールシフェラーゼレポータープラスミドをHEK293細胞にトランスフェクトした。,ルシフェラーゼ活性はMZF1結合部位をスクリーニングするために検出された。【結果】異なる種類のプラスミドはすべてのPCR分析とヌクレオチド配列決定により正確に構築したことを確認した。pGL3RGC32FLとpIRES2EGFP MZF1のプラスミドもHEK293細胞に共トランスフェクションし,ルシフェラーゼ活性が検出された。RGC32遺伝子の転写活性はMZF1の過剰発現に応答して著しく増加したことを示した。さらに,pGL3RGC32FLまたはpGL3RGC32,pGL3RGC32とpGL3RGC32とpIRES2EGFP MZF1のプラスミドをHEK293細胞にトランスフェクトし,異なるグループのルシフェラーゼ活性を測定した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【Powered by NICT】
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, 【Automatic Indexing@JST】
分類 (2件):
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細胞生理一般  ,  分子遺伝学一般 
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