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J-GLOBAL ID：201502241539865877   整理番号：15A0091172

蛋白質と転写レベルに及ぼすブタサーコウイルスタイプ2様ウイルスP1のORF2とORF3の同定【Powered by NICT】

Identification of the ORF2 and ORF3 of Porcine Circovirus Type 2-Like Virus P1 on the Protein and Transcriptional Levels

著者 (4件)： Wang Fengzhi (Coll. of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University; Key Lab. of Veterinary Biological Engineering and ...) ,  Wen Libin (Coll. of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University; Key Lab. of Veterinary Biological Engineering and ...) ,  Yao Huochun (Coll. of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural Univ., Nanjing) ,  He Kongwang (Inst. of Veterinary Medicine, Jiangsu Acad. of Agricultural Sciences/Key Lab. of Veterinary Biological Engineering ...)
資料名： Zhongguo Nongye Kexue  (Zhongguo Nongye Kexue)
巻： 47  号： 14  ページ： 2863-2871  発行年： 2014年 
JST資料番号： W1459A  ISSN： 0578-1752  CODEN： CKNYAR  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】本研究の目的は,ブタサーコウイルス2型様ウイルスP1におけるオープンリーディングフレームORF2およびORF3の存在を決定することである〔方法〕P1分子クローニングのトランスフェクション後,全RNAを抽出し,精製し,次いでRT-PCRは,特異的プライマーを用いたRNAの検出のために開発したORF2およびORF3であった。PCRの生成物はAxyprepTM DNAゲル抽出キットを用いて回収し,次にTrans5αcompetetent細胞は形質転換した,PCRによるポジティブに検定された後の単一コロニーを選択し,配列決定した。同時に,P1ORF2およびORF3の5’-および3’-末端はRACEを用いて増幅した。さらに,P1ORF2およびORF3のB細胞エピトープは,それらの配列に従って予測され,それに対応したエピトープペプチドは標準的な段階的固相合成法を用いて合成し,抗原性を増加させるためのキーホールリンペットヘモシアニン(KLH)に結合させた。ニュージーランド白色ウサギはKLH共役ペプチドで免疫した抗P1ORF2およびORF3ポリクローナル抗体を調製した。従来の間接ELISAは力価,合成ペプチド抗原で被覆したを検出するために応用し,それらの吸光度は,450nm波長で測定した。最高血清希釈S/N≧2.1の抗体価と同定された。P1及び二ポリクローナル抗体の反応性は,免疫組織化学により検出された,トランスフェクト細胞におけるP1のコピーをリアルタイムPCRにより決定した。〔結果〕ORF2およびORF3の特異的プライマーを用いたRT-PCRは,111bpと128bp標的フラグメント,P1ORF2およびORF3と100%の配列相同性を持つを増幅できた。P1ORF2の5’-および3’-RACE末端がサイト11(G)と168(T)に位置し,それぞれ,P1ORF3の5′-と3′-RACE末端は部位285(T)と579(A)に位置するであった。予測によると,合成したエピトープペプチドのアミノ酸配列はORF2:CLSRLPQSERPPGRWおよびORF3:CVYPKVRERRVLKMPた。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【Powered by NICT】

シソーラス用語： ウイルス ,  遺伝子クローニング ,  RT-PCR法 ,  プライマー【遺伝】 ,  RNA【核酸】 ,  *PCR法 ,  DNA【核酸】 ,  形質転換 ,  免疫原性 ,  免疫 ,  ポリクローナル抗体 ,  ELISA ,  抗原 ,  抗体価 ,  アミノ酸配列
準シソーラス用語： RACE , 【Automatic Indexing@JST】

分類 (1件)： 分子遺伝学一般  (EC02010J)

タイトルに関連する用語 (4件)： 蛋白質 ,  転写 ,  ウイルス ,  同定