CRISPR媒介ゲノム編集のためのin vitroおよびin vivoでのガイドRNAへのリボザイムflanked RNAの自己プロセシング【Powered by NICT】

Gao Yangbin; Zhao Yunde

文献

J-GLOBAL ID：201502262070943690 整理番号：14A1442724

CRISPR媒介ゲノム編集のためのin vitroおよびin vivoでのガイドRNAへのリボザイムflanked RNAの自己プロセシング【Powered by NICT】

Self-processing of ribozyme-flanked RNAs into guide RNAs in vitro and in vivo for CRISPR-mediated genome editing

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資料名：
巻： 56 号： 4 ページ： 343-349 発行年： 2014年
JST資料番号： C2552A ISSN： 1672-9072 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：オーストラリア (AUS) 言語：英語 (EN)

CRISPR/Cas9はガイドRNA(gRNA)分子を用いる配列特異的DNA切断を実行するために,多くの生物におけるゲノム編集のための広く用いられている。g RNAのいずれかの末端での修飾はしばしばCas9/gRNAを不活性にする。今までのところ,in vivo gRNAの生産はU6とU3snRNAプロモーターを用いて達成した。しかし,U6とU3プロモーターは細胞特異性の欠如とin vitro転写のための不適切性のような主要な限界がある。ここでは,in vitroとin vivoの両方でg RNAを効率的に生成するための汎用的方法を提示した。,一度転写され,設計されたgRNAの両端でリボザイム配列を持つRNA分子を生成するRGRと名付けた人工遺伝子を設計した。RGRの一次転写物は自己触媒開裂を起こして目的のgRNA,in vitroおよび酵母の両方でDNA標的の配列特異的切断を効率的に導くことができるを生成することを示した。適切なプロモータである選べばRGRはプロモーターから転写でき,細胞及び組織特異的ゲノム編集を可能にした。CRISPRによって作られた変異の検出は,しばしば酵素消化,ハイスループット分析によく適合するしないにより達成される。我々のシステムはユニバーサルプライマーの使用を可能にするin vitroでの任意のgRNA,gRNA/CRISPRによる突然変異を検出するためのCas9蛋白質と一緒に使える,を生成した。結論として,著者らは特異的な細胞および組織における標的突然変異を生成するために,および発生した突然変異を効率的に検出のための汎用的方法を提供した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【Powered by NICT】

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植物生理学一般 , 植物の生化学

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