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J-GLOBAL ID：201502272309253921   整理番号：15A0093576

Broccoli:蛍光基盤選択と指向進化による緑色蛍光蛋白質のRNA模倣の迅速な選択

Broccoli: Rapid Selection of an RNA Mimic of Green Fluorescent Protein by Fluorescence-Based Selection and Directed Evolution

著者 (4件)： FILONOV Grigory S. (Weill Cornell Medical Coll., New York, USA) ,  MOON Jared D. (Weill Cornell Medical Coll., New York, USA) ,  SVENSEN Nina (Weill Cornell Medical Coll., New York, USA) ,  JAFFREY Samie R. (Weill Cornell Medical Coll., New York, USA)
資料名： Journal of the American Chemical Society  (Journal of the American Chemical Society)
巻： 136  号： 46  ページ： 16299-16308  発行年： 2014年11月19日 
JST資料番号： C0254A  ISSN： 0002-7863  CODEN： JACSAT  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： アメリカ合衆国 (USA)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 最近,SELEXを用いて,GFP様フルオロホア(DFHBI)と特異的に結合し蛍光を発色するGFP模倣性RNAアプタマーが生成された。もっとも優れたすぐれた輝度を示すRNAアプタマーとして,Spinachおよびその改良型Spinach2が開発された。本論文はRNA-フルオロホア複合体の発生を単純化し,細胞内発現にもっともよく適合するアプタマー製造に関するSELEXプロトコールである。この方法によるアプタマー選択は,基本的にビーズ結合フルオロホアを用いる標準的SELEXに依拠するが,それに加えて大腸菌におけるRNA発現に伴う蛍光発色に基づくスクリーニングを実施し,それに続いてFACS解析(蛍光活性化細胞選別法)に切り替え,細胞内で優れた機能性を持つRNAアプタマーの選択法に基づく。得られたアプタマーは定方向進化法を用いて最適化した。本法によってSpinachおよびSpinach2より短い,49nt長さのアプタマーであるBroccoliを開発した。BroccoliはDFHBIまたは改良されたフルオロホアあるDFHBI-ITと結合し輝度の高い緑色蛍光を示した。BroccoliはSpinach2と類似した高い折り畳み効率を示すが,折り畳みに際してマグネシウム依存性が低く,熱安定性が高い。さらにSpinach2と異なり,in vivoにおいて折り畳み構造をとるのにtRNA足場を必要とせず,細胞内でより良く機能することを示した。

シソーラス用語： 遺伝学実験技術 ,  発色団 ,  細胞分画法 ,  生物進化 ,  *RNA【核酸】 ,  核酸 ,  大腸菌 ,  熱安定性 ,  折畳み構造 ,  tRNA
準シソーラス用語： *Broccoli ,  FACS解析 ,  *RNAアプタマー ,  *SELEX法 ,  Spinach ,  Spinach2 ,  アプタマー ,  フルオロホア ,  蛍光発色セルソーター ,  定方向進化

分類 (1件)： 生物学的機能  (EB04020F)

物質索引 (2件)： 4-[(Z)-3,5-ジフルオロ-4-ヒドロキシベンジリデン]-1,2-ジメチル-1H-イミダゾール-5(4H)-オン ,  4-[(Z)-3,5-ジフルオロ-4-ヒドロキシベンジリデン]-2-メチル-1-(2,2,2-トリフルオロエチル)-1H-イミダゾール-5(4H)-オン

タイトルに関連する用語 (6件)： 蛍光 ,  基盤 ,  進化 ,  緑色蛍光蛋白質 ,  RNA ,  模倣