植物におけるカスタマイズしたエンドヌクレアーゼの切断活性のための簡単な試験

BUDHAGATAPALLI Nagaveni; SCHEDEL Sindy; GURUSHIDZE Maia; PENCS Stefanie; PENCS Stefanie; HIEKEL Stefan; RUTTEN Twan; KUSCH Stefan; MORBITZER Robert; LAHAYE Thomas; PANSTRUGA Ralph; KUMLEHN Jochen; HENSEL Goetz

文献

J-GLOBAL ID：201602226404454131 整理番号：16A0437577

植物におけるカスタマイズしたエンドヌクレアーゼの切断活性のための簡単な試験

A simple test for the cleavage activity of customized endonucleases in plants

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資料名：
巻： 12 号： Mar ページ： 12:18 (WEB ONLY) 発行年： 2016年03月
JST資料番号： U7033A ISSN： 1746-4811 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：イギリス (GBR) 言語：英語 (EN)

背景:カスタマイズしたエンドヌクレアーゼ[転写アクチベーター様エフェクタヌクレアーゼ(TALENs)およびRNAを導かれたエンドヌクレアーゼ(RGENs)]は,様々の宿主植物における突然変異誘発の効果的試薬であることが知られているが,安定トランスジェニック植物の作成に投資する前に,新しく設計されたエンドヌクレアーゼ構造物は,官能性に関して若干のプレ確認を必要とする。結果:突然変異する,機能しないyfpレポーター遺伝子のトランスレーショナルリーディングフレームを再構成することに基づき,簡単な,バイオリスティクスベースの葉表皮過渡的発現試験を,開発した。突然変異効力の定量化は,構成性のmCherry発現カセットを有する外植片を共同攻撃することによって可能になった。そして,それによって,突然変異効率のための計量の役目を果たすために赤色と黄色の蛍光を発している細胞の数間の比率を可能にした。タバコとオオムギでのgfpの易感染性バージョンのどちらの安定変異対立遺伝子でも攻撃すること,またはTALENs/RGENsを有するオオムギMLO遺伝子は,サイト誘導突然変異を誘導する能力を確かめた。結論:カスタマイズしたエンドヌクレアーゼの切断活性を測定する簡便操作を確立した。本システムは,エンドヌクレアーゼプラットフォームから独立していた,および双子葉と単子葉植物宿主で操作した。それは,安定突然変異体の作成の前に,TALEN/RGENの官能性の確認を可能にしただけでなく,しかし,また,エンドヌクレアーゼ構造物の設計を最適化するための好適な道具の役目を果たした。(翻訳著者抄録)

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分子遺伝学一般 , 植物の生化学

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