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J-GLOBAL ID：201602245302203841   整理番号：16A0991090

有機りん系殺虫剤残留物の分析のためのコドン最適化ブチリルコリンエステラーゼの発現と特性化【Powered by NICT】

Expression and characterization of a codon-optimized butyrylcholinesterase for analysis of organophosphate insecticide residues

著者 (7件)： Tian Jingjing (College of Food Science and Engineering, Beijing University of Agriculture) ,  Chen Xiangning (College of Food Science and Engineering, Beijing University of Agriculture) ,  Xie Yuanhong (College of Food Science and Engineering, Beijing University of Agriculture) ,  Lu Yong (Beijing Food Safety Monitoring Center) ,  Xu Wentao (College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University) ,  Xu Li (College of Food Science and Engineering, Beijing University of Agriculture) ,  Du Bin (College of Food Science and Engineering, Beijing University of Agriculture)
資料名： Nongye Kexue Xuebao(Yingwenban)  (Nongye Kexue Xuebao(Yingwenban))
巻： 15  号： 3  ページ： 684-693  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2625A  ISSN： 2095-3119  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 野菜,果実,茶および結晶粒も有機りん殺虫剤残留物は食中毒の主要原因である。有機リン酸化合物はアセチルコリンエステラーゼとブチリルコリンエステラーゼ(BChE, EC 3.1.1.8)の活性の不可逆的阻害,有機リン系殺虫剤の迅速検出のための両候補であることを引き起こす可能性がある。BChEを用いた有機リン系殺虫剤を検出するための容易なtohandle法を開発するために,ヒトからBChEをPichia pastorisのコドン使用バイアスに従って最適化し,Pichia pastoris GS115で発現させた。コドン最適化c DNAは,未変性のものとコドンの同一性の37.3%を共有していた。しかし,発表されたアミノ酸配列は天然ヒトブチリルコリンエステラーゼ遺伝子(hBChE)のそれと同一であった。四種類の塩基((G+C)比)中のグアニンとシトシンの比は40から47%に増加した。組換えhBChE発現は14.7U mL(-1)の活性,68%の収率と8.1Umg-1の比活性を持つニッケル親和性クロマトグラフィーによる3.2×10~3倍に精製された全蛋白質濃度292mg mL(-1)に達した。組換hBChEは7.4と50°Cで最適活性を示し,広いpH範囲(>pH=4.0で8.0~60%の活性)で高い活性を示した。さらに,高温度(50と60°Cで>60%の活性60分まで),70°Cで良好な安定性に良好な適合性を持っていた。酵素はLi +,Co +,Zn(2+)とエチレンジアミン四酢酸(EDTA)により活性化されたが,Mg(2+),Mn(2+),Fe(2+),Ag +とCa(2+)により阻害された。Na +はその活性にほとんど影響しなかった。Michaelis定数(Km)と最大反応速度(Vm)のhBChEの値は89.4mmol・L-1(-1)と1 721mmol分(-1)mg(-1)であった。四殺虫剤へのhBChEの二分子速度定数(Ki)であったデンキウナギAChE(EeAChE)のそれと類似しており,高いウマBChE(HoBChE)。hBChE物質(IC50)の半最大阻害濃度の全ての値はHoBChEのそれよりも低かったが,hBChE最もIC50はジクロルボス以外EeAChEのそれよりも低かった。hBChEの適用性をさらに六種野菜試料中の有機リン系殺虫剤残基の検出によって確認した。このように,P.pastorisによる過剰発現異種hBChEは現場で有機リン剤の迅速検出法の開発のための十分な材料を提供し,有機りん酸検出キットを生産するであろう。Data from the ScienceChina, LCAS.【Powered by NICT】

シソーラス用語： 適応性 ,  ヒト ,  *殺虫剤 ,  *最適化 ,  Pichia ,  DNA【核酸】 ,  Michaelis定数 ,  *コドン ,  *キャラクタリゼーション ,  アミノ酸配列 ,  アセチルコリンエステラーゼ ,  *有機リン系殺虫剤 ,  反応速度
準シソーラス用語： Pichia pastoris ,  *ブチリルコリンエステラーゼ , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： ブチリルコリンエステラーゼ ,  有機リン系殺虫剤残留物 ,  Pichia pastoris ,  発現 ,  コドン最適化

分類 (1件)： 遺伝子発現  (EC02040Q)

タイトルに関連する用語 (7件)： 有機りん系殺虫剤 ,  残留物 ,  分析 ,  コドン最適化 ,  ブチリルコリンエステラーゼ ,  発現 ,  特性化