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J-GLOBAL ID：201602249667870553   整理番号：16A1121947

ブタCGAS遺伝子のクローニングと原核発現【JST・京大機械翻訳】

Cloning and Prokaryotic Expression of Porcine cGAS Gene

著者 (10件)： Du Lili (Key Laboratory of Regulation on Animal Growth and Development of Ministry of Agriculture of China, Henan Agricultural University) ,  Fan Shuangshuang (Key Laboratory of Regulation on Animal Growth and Development of Ministry of Agriculture of China, Henan Agricultural University) ,  Li Saisai (Key Laboratory of Regulation on Animal Growth and Development of Ministry of Agriculture of China, Henan Agricultural University) ,  Chen Peige (Key Laboratory of Regulation on Animal Growth and Development of Ministry of Agriculture of China, Henan Agricultural University) ,  Chen Lei (Key Laboratory of Regulation on Animal Growth and Development of Ministry of Agriculture of China, Henan Agricultural University) ,  Sun Shiping (Key Laboratory of Regulation on Animal Growth and Development of Ministry of Agriculture of China, Henan Agricultural University) ,  Fan Wenjie (Key Laboratory of Regulation on Animal Growth and Development of Ministry of Agriculture of China, Henan Agricultural University) ,  Wang Jiang (Key Laboratory of Regulation on Animal Growth and Development of Ministry of Agriculture of China, Henan Agricultural University) ,  Wang Yueying (Key Laboratory of Regulation on Animal Growth and Development of Ministry of Agriculture of China, Henan Agricultural University) ,  Zhong Kai (Key Laboratory of Regulation on Animal Growth and Development of Ministry of Agriculture of China, Henan Agricultural University)
資料名： Zhongguo Nongye Kexue  (Zhongguo Nongye Kexue)
巻： 49  号： 9  ページ： 1803-1809  発行年： 2016年 
JST資料番号： W1459A  ISSN： 0578-1752  CODEN： CKNYAR  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】本研究の目的は,クリック-アデノシン合成酵素(CYCLIC アデノシン MONOPHOSPHATE-ADENOSINE SYNTHASE)である。細胞質DNAを認識し,ATPとGTPを触媒して第二メッセンジャーCGAMPを生成し,次いでSTING依存的様式で転写因子IRF3を活性化し,生体固有の免疫を開始する。ブタCGAS遺伝子を含む組換えプラスミドPBBB3A-HIS6-NUSA-CGASを構築し、原核発現を行い、CGASタンパク質を獲得し、IN VITROでの触媒合成及び天然免疫過程における作用を検討するために基礎を築いた。[方法]ブタの脾臓のCDNAをテンプレートとして、ブタCGASのタンパクコード領域(OPEN READING FRAME, ORF)をクローニングした。この遺伝子を酵素法によりプロピオン酸誘導型原核発現ベクターPBBB3A-HIS6-NUSA-LICにクローニングした。PCR法により陽性クローンを同定し,配列決定した。配列決定により正確なクローン液を抽出し,E.COLI BL21(DE3)に形質転換した。細菌が群に成長したとき、酸はHIS6-NUSA-CGAS融合タンパクを誘導し、20MMOL・L~(-1)酸で20°C、180R/MINでそれぞれ0、2、4、6、8、10Hを誘導し、最適な誘導時間を確定した。次に,0,5,10,15,20,25,30,35,40,45MMOL・L(-1)のプロピオン酸ナトリウムを20°C,180R/MINで6時間誘導し,最適誘導濃度を決定した。また、それぞれ20°C、30°C、37°Cで20MMOL・L~(-1)酸、180R/MINで6H培養し、最適誘導温度を確定した。最適誘導条件をスクリーニングし,SDS-PAGEとWESTERN BLOTTINGによって同定した。【結果】(1)ブタのCGAS遺伝子をクローニングし,そのORFの長さは1BPであった。(2)CGAS3A-HIS6-NUSA-CGASを構築した。(3)HIS6-NUSA-CGAS融合タンパク質は37°Cにおいて、20MMOL・L~(-1)酸を添加し、6時間誘導した時に発現量が最も高かった。(4)HIS6-NUSA-CGAS融合蛋白質は,溶菌液の上清と沈殿物において発現し,相対分子量は111.87KDであった。【結語】CGAS融合蛋白質を大腸菌発現系で首尾よく発現させ,IN VITROでCGAS融合蛋白質を発現するための技術的方法を提供した。Data from the ScienceChina, LCAS.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 合成酵素 ,  沈殿物 ,  脾臓 ,  SDS-PAGE ,  PCR法 ,  分子量 ,  *遺伝子 ,  DNA【核酸】 ,  融合タンパク質 ,  クローン ,  プラスミド ,  溶菌 ,  形質転換
準シソーラス用語： 発現ベクター ,  *クローニング , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： porcine cGAS ,  ligation-independent cloning ,  propionate induction ,  prokaryotic expression

分類 (2件)： 遺伝子発現  (EC02040Q) ,  酵素一般  (EB09010D)

タイトルに関連する用語 (5件)： ブタ ,  cGAS ,  遺伝子 ,  クローニング ,  発現