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J-GLOBAL ID：201602277972684718   整理番号：16A0854347

CRISPR/CAS9POMP遺伝子を群場蛍光報告システム及びその応用を構築した。【JST・京大機械翻訳】

Construction of mCherry reporter system of POMP by Crispr/Cas9 and its application

著者 (5件)： Zhao Xiangxiang (College of Life Science, Zhejiang Sci-Tech University) ,  Shen Junjie (Institute of Clinical Pathology, Southwest Hospital, Third Military Medical University) ,  Peng Wei (Institute of Clinical Pathology, Southwest Hospital, Third Military Medical University) ,  Jiang Lupin (Institute of Clinical Pathology, Southwest Hospital, Third Military Medical University) ,  Qian Cheng (Institute of Clinical Pathology, Southwest Hospital, Third Military Medical University)
資料名： Disan Junyi Daxue Xuebao  (Disan Junyi Daxue Xuebao)
巻： 38  号： 2  ページ： 141-147  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2217A  ISSN： 1000-5404  CODEN： DYXUE8  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 目的CRISPR/CAS9システムを用いて蛍光IN SITU体成熟プロテアーゼ蛋白質(PROTEASOME MATURATION PROTEIN,POMP)ゲノムの報告システムを確立した。方法はPOMP-2A-MCHERRY-ベクターをトランスフェクトしたHEK293(HUMAN EMBRYONIC KDINEY 293 CELL)細胞のTを構築した;フローサイトメトリーでMCHERRY陰性陽性細胞を獲得する;リアルタイム蛍光定量PCR(REAL-TIME FLUORESCENT QUANTITATIVE PCR)MCHERRY陽性細胞におけるPOMP転写レベルの遺伝子発現の違いをアニオン検出;,WESTERN BLOTMCHERRY陰性陽性細胞におけるPOMP蛋白質発現差およびHUH7細胞におけるJNK1/JNK2燐酸化のレベルを検出した;MCHERRY陰性陽性細胞におけるプロテアーゼ活性の差異をプロテアーゼ活性キットで検出した。POMPMCHERRY結果陽性細胞の蛋白質発現レベルはMCHERRY陰性細胞より高く1.3倍(P<0.01),しかし,その遺伝子転写レベルの差は必ずしも顕著ではなかった(P>0.05);同時にMCHERRY陽性細胞よりMCHERRY陰性細胞中のユビキチン化レベルは1.2倍(P<0.01)高かった;またMCHERRY陽性細胞におけるプロテアーゼ活性は陰性細胞(P<0.01)よりも有意に高かった;低発現はPOMPのHUH7細胞において,JNK1およびJNK2のリン酸化レベルはそれぞれ1.5倍と1.4倍(P<0.01)に上昇した。結論:POMP蛍光報告システムの構築に成功した;HUH7細胞にこのシステムを使うと,POMP1、JNK2とJNKのリン酸化レベルを変えることを発見し,その可能性のJNKシグナル伝達経路によりにより細胞の増殖およびアポトーシスに影響する。Data from the ScienceChina, LCAS.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： リン酸化 ,  ゲノム ,  ユビキチン化 ,  遺伝子発現 ,  *蛍光 ,  ベクター ,  プロテイナーゼ ,  フローサイトメトリー ,  *遺伝子 ,  アポトーシス ,  タンパク質 ,  蛋白質発現 ,  *CRISPR配列 ,  シグナル伝達経路 ,  分子遺伝現象
準シソーラス用語： 伝達経路 ,  実時間 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： Crispr/Cas9 ,  proteasome maturation protein ,  mCherry ,  HEK293

分類 (1件)： バイオアッセイ  (EA03060N)

タイトルに関連する用語 (7件)： CRISPR ,  遺伝子 ,  群 ,  蛍光 ,  報告 ,  応用 ,  構築