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J-GLOBAL ID：201602288263978400   整理番号：16A0862730

アデノウイルスBMP2とBMP7遺伝子は骨髄間葉系幹細胞にトランスフェクションし共発現ヒトBMP仲介2/7ヘテロ二量体【JST・京大機械翻訳】

The feasibility of adenoviral co-transduction of BMP2 and BMP7 for the expression of recombinant human BMP2/7 heterodimer in rat bone marrow mesenchymal stem cells

著者 (8件)： Gao Tao (Weifang Medical University) ,  Tang Shengjian (Weifang Medical University) ,  Niu Changying (Weifang Medical University) ,  Miao Chunlei (Weifang Medical University) ,  Zhang Wei (Weifang Medical University) ,  Zhou Lulu (Weifang Medical University) ,  Wu Caifeng (Weifang Medical University) ,  Liu Fangjun (Weifang Medical University)
資料名： Zhonghua Zhengxing Waike Zazhi  (Zhonghua Zhengxing Waike Zazhi)
巻： 32  号： 2  ページ： 125-130  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2316A  ISSN： 1009-4598  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 目的:アデノウイルスにより仲介BMP2およびBMP7遺伝子はラット骨髄間葉系幹細胞(BMSCS)の共発現を,ラットBMSCSの遺伝子共転移標的細胞としての実現可能性を検討し,有効な組換えヒトBMP2/7蛋白質ヘテロ2量体発現の可否。方法:3匹の10週齢の雄性FISCHERラットで,その骨髄組織をとるBMSCSを分離精製し,そしてプレートIN VITRO外転を世代培養。同時に,構築し,そしてBMP2またはBMP7標的遺伝子の高力価ADSを携帯する予備組換え型アデノウイルスを作製し,パッケージした。,別10 000個/CM2の細胞密度を6穴培養プレートに播種し,細胞接着は一晩培養体外培養の第3世代BMSCSを取った。実験群の細胞は無血清培養液希釈の携帯BMP2とBMP7の標的遺伝子のアデノウイルス液各100ΜL(それぞれウイルス感染多重度MOI 100)添加し,一方対照群細胞に感染を加えて複素数はも200MOIのGFP遺伝子の陰性対照アデノウイルス液のキャリアである。細胞は7日の培養の後に,この条件は細胞培養上清を収集し,抗ヒトBMP7抗体架橋を経てのG蛋白質類縁過層析柱Lv,を特異性抗体の免疫蛋白質の沈殿を取得,WESTERN BLOTおよびBMP2/7ヘテロ二量体の効率的IN VITRO発現をELISAで検出した。結果から,BMP2またはBMP7目の遺伝子のプラスミドベクターがある経HEK293T細胞包装割複製欠損組換えアデノウイルスを携帯し、そして構築に成功し,WESTERN BLOT検出BMP2を観測した。55大小処陽性目的バンドがあると示したしかし標的遺伝子BMP7は表現は49大小処陽性バンドがある;陰性対照アデノウイルスAD-GFPを感染させたラットBMSCS 48 H,顕微鏡下でBMSCS接着は良好であったと見られ,細胞毒性現象は見られなかった;蛍光顕微鏡下で緑色蛍光蛋白質の有意な発現は見られた;アデノウイルスベクター仲介BMP2とBMP7遺伝子はラットBMSCSを共トランスフェクションして 48 H後,WESTERN-BLOT検出細胞上清,47大小処にはBMP2/7異種二聚体目のバンド陽性発現が検出された。ELISAで定量的に示すである2/7ヘテロ組換えBMPタンパク質の発現量は (4.33±0.42)NG/MLであり,対照群(0.08±0.02)NG/ML,対サンプルT検定を経てであった。2群の比較差異に統計学の意義(P<0.05)があった。結論:ラットBMSCSはアデノウイルス仲介遺伝子トランスフェクションの有効な標的細胞であり,アデノウイルスはBMP2とBMP7標的遺伝子組換えBMPの共発現が効果的で,高い発現レベルを獲得したヒト源2/7蛋白質ヘテロ2量体をBMSCSにおいて実現した保有した。真核細胞のヘテロ2量体BMP2/7蛋白質発現は誘導ラット骨髄間葉系幹細胞の体内外骨芽実験のさらなる研究のために基礎を築く。Data from the ScienceChina, LCAS.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *骨髄 ,  *トランスフェクション ,  蛍光顕微鏡 ,  遺伝子導入 ,  *ヒト ,  緑色蛍光タンパク質 ,  血清 ,  遺伝子ターゲティング ,  *アデノウイルス科 ,  細胞密度 ,  細胞毒性 ,  ELISA ,  細胞接着
準シソーラス用語： 蛋白質発現 ,  *共発現 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： Bone morphogenetic proteins ,  Bone marrow ,  Mesenchymal stem cells ,  Adenoviruses ,  Gene transfer techniques

分類 (2件)： 細胞生理一般  (EF02010S) ,  運動器系の基礎医学  (GG01020B)

タイトルに関連する用語 (11件)： アデノウイルス ,  BMP2 ,  BMP7 ,  遺伝子 ,  骨髄間葉系幹細胞 ,  トランスフェクション ,  共発現 ,  ヒト ,  BMP ,  仲介 ,  ヘテロ二量体