抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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【目的】酸化低密度リポ蛋白質(ox-LDL)によって誘発されるヒト臍帯静脈内皮細胞における酸化ストレスに及ぼすToll様受容体4(TLR4)の効果を調査して,上記の反応に及ぼすアンギオテンシン(Ang)-(1-7)の効果と機構を調査する。方法:ヒト臍帯静脈内皮細胞をin vitroで培養し,細胞を6つの群に分けた。【方法】ox-LDL(75mg/L),ox-LDL(75mg/L),ox-LDL(75mg/L),およびox-LDL(75mg/L)による前処理の30分後に,ox-LDL(75mg/L)で処理し,ox-LDL(75mg/L)によって処理した後,30分間,ox-LDL(75mg/L)によって処理した(A-779μmol/L)。24時間の介入後,アネキシンV(アネキシンV)-FITC/ヨウ化プロピジウム(PI)二重標識フローサイトメトリーと末端デオキシヌクレオチド転移酵素媒介dUTP末端標識法(TUNEL)を用いて,細胞アポトーシスを検出した。活性酸素種(R OS)のレベルを検出し,リアルタイム蛍光定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)を用いて,TLR4とNADPHオキシダーゼ4(NOX4)のmRNA発現を検出した。。・・・. 7,7′-ジクロロフルオレセイン二重酢酸塩(DCFH-DA)のレベルを測定した。ウェスタンブロット法を用いて,TLR4とNOX4の蛋白質発現を検出した。【結果】(1)Annexin-FITC/PI二重標識フローサイトメトリーは,ox-LDL群のアポトーシス率が,対照群のそれより高かったことを示した[(21.18±1.40)%対(1.59±0.26)%,P<0.01]。ox-LDL+Ang-(1-7)群[(7.42±1.07)%]とox-LDL+HTA125群[(9.19±1.01)%]のアポトーシス率はox-LDL群より低かった(P<0.01)。【結果】ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779群[(19.91±1.30)%]およびox-LDL+A-779群[(20.47±0.95)%]のアポトーシス率は,ox-LDL+Ang-(1-7)群のそれより高かった(P<0.01)。(2)TUNEL法により,ox-LDL群のアポトーシス率は,対照群のそれより高かった[(10.83±0.77)%対(2.83±0.82)%,P<0.01]。ox-LDL+Ang-(1-7)群[(3.66±0.54)%]とox-LDL+HTA125群[(4.97±0.60)%]のアポトーシス率はox-LDL群より低かった(P<0.01)。【結果】ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779群[(10.69±0.62)%]およびox-LDL+A-779群[(11.43±0.42)%]のアポトーシス率は,ox-LDL+Ang-(1-7)群より高かった(P<0.01)。(3)ox-LDL群におけるROSレベルは,対照群におけるそれより高かった(0.093±0.014対0.053±0.011,P<0.01)。ox-LDL+Ang-(1-7)群(0.063±0.011)とox-LDL+HTA125群(0.070±0.010)のROSレベルはox-LDL群より低かった(P<0.01と0.05)。ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779群(0.088±0.003)とox-LDL+A-779群(0.095±0.005)のROSレベルはox-LDL+Ang-(1-7)群より高かった(P<0.01)。(4)ox-LDL群におけるNOX4mRNAの発現は,対照群におけるそれより高かった(11.74±0.65対1.00±0.00,P<0.01)。ox-LDL+Ang-(1-7)群(2.85±0.75)とox-LDL+HTA125群(5.57±0.52)NOX4のmRNA発現レベルはox-LDL群より低かった(P<0.01)。ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779群(10.51±0.54)およびox-LDL+A-779群(11.04±1.01)におけるmRNAの発現は,ox-LDL+Ang-(1-7)群より有意に高かった(P<0.01),一方,ox-LDL群におけるTLR4のmRNA発現は,対照群におけるそれより高かった(27.60±1.86対1.00±0.00,P<0.01)。ox-LDL+Ang-(1-7)群(8.00±1.03)およびox-LDL+HTA125群(14.83±0.97)におけるTLR4mRNA発現は,ox-LDL群のそれらより低かった(P<0.01)。ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779群(24.81±2.19)とox-LDL+A-779群(26.64±0.65)のTLR4mRNA発現レベルはox-LDL+Ang-(1-7)群より高かった(P<0.01)。(5)ox-LDL群におけるNOX4蛋白質の発現は,対照群におけるそれより高かった(0.61±0.09対0.23±0.02,P<0.01)。ox-LDL+Ang-(1-7)群(0.27±0.03)とox-LDL+HTA125群(0.22±0.02)NOX4のタンパク質発現レベルはox-LDL群より低かった(P<0.01)。ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779群(0.58±0.06)およびox-LDL+A-779群(0.61±0.03)における蛋白質発現はox-LDL+Ang-(1-7)群より有意に高かった(0.18±0.02対0.08±0.01,P<0.01)。ox-LDL+Ang-(1-7)群(0.07±0.01)およびox-LDL+HTA125群(0.09±0.01)におけるTLR4発現は,ox-LDL群(P<0.01)におけるそれより有意に低かった(P<0.01)。ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779群(0.18±0.02)およびox-LDL+A-779群(0.20±0.02)におけるTLR4の蛋白質発現は,ox-LDL+Ang-(1-7)群のそれより高かった(すべてのP<0.01)。結論:TLR4はox-LDLによって誘導されるヒト臍帯静脈内皮細胞の損傷において重要な役割を果たし,Ang-(1-7)は特異的Mas受容体を通して細胞に対する保護作用を発揮する。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】
