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J-GLOBAL ID:201702227551199387   整理番号:17A1777428

ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド代謝の正確な測定のための細胞培養(SILEC)中の必須栄養素による安定同位体標識【Powered by NICT】

Stable isotope labeling by essential nutrients in cell culture (SILEC) for accurate measurement of nicotinamide adenine dinucleotide metabolism
著者 (8件):
資料名:
巻: 142  号: 23  ページ: 4431-4437  発行年: 2017年 
JST資料番号: A0392A  ISSN: 0003-2654  CODEN: ANALAO  資料種別: 逐次刊行物 (A)
記事区分: 原著論文  発行国: イギリス (GBR)  言語: 英語 (EN)
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ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)とニコチンアミドアデニンジヌクレオチドりん酸(NADP)は生命の全ての領域を通して還元-酸化(レドックス)反応を仲介する保存された代謝補因子である。およびこれらの補因子からの還元当量の移動を含む合成経路と細胞過程の多様性は広い関心のNAD(H)とNADP(H)の正確な定量と代謝追跡を行った。しかし,現在の分析法は,典型的には,試料マトリックスの交絡効果を内蔵していない標準曲線に依存している。細胞内N AD(H)とNADP(H)プールの効率的標識のための細胞培養(SILEC)法における必須栄養素による安定同位体標識を考案するほ乳類細胞におけるNAD合成のためのナイアシンとトリプトファンの必須条件を利用した。このアプローチの結合液体クロマトグラフィー-高分解能質量分析(LC HRMS)による検出を用いた,マトリックス試料中の内部標準として使用するためのNAD派生代謝産物のライブラリーへの[~13C_3~15N_1]-ニコチンアミド部分を組み込むことの有用性を実証した。[~13C_3~15N_1]-ニコチンアミドと[~13C_11]-トリプトファンを組み込んだ二標識系を用いて,著者らはS.cerevisiaeにおけるサルベージの相対的寄与と,それぞれ,de novo NAD合成と基底条件下でHepG2ヒト肝細胞癌細胞を定量化した。原理の証明として,NADの定量のための直線範囲を改善したおよびマウス肝臓におけるNAD(H)の分析にこの方法を適用した。この方法はSILECの一般化可能性を示し,細胞および組織NAD(H)とNADP(H)の代謝を定量化し,追跡するための安定同位体標識内部標準のライブラリーを構築するための簡単な方法を提供する。Copyright 2017 Royal Society of Chemistry All Rights reserved. Translated from English into Japanese by JST【Powered by NICT】
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