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J-GLOBAL ID：201702227574853171   整理番号：17A1974305

Neuro2a細胞におけるモニタリングATF4蛋白質発現のための新規HiBiTペプチドタグの応用【Powered by NICT】

Application of a novel HiBiT peptide tag for monitoring ATF4 protein expression in Neuro2a cells

著者 (6件)： Oh-hashi Kentaro (United Graduate School of Drug Discovery and Medical Information Sciences, Gifu University, 1-1 Yanagido, Gifu 501-1193, Japan) ,  Oh-hashi Kentaro (Department of Chemistry and Biomolecular Science, Faculty of Engineering, Gifu University, 1-1 Yanagido, Gifu 501-1193, Japan) ,  Furuta Eri (Department of Chemistry and Biomolecular Science, Faculty of Engineering, Gifu University, 1-1 Yanagido, Gifu 501-1193, Japan) ,  Fujimura Keito (Department of Chemistry and Biomolecular Science, Faculty of Engineering, Gifu University, 1-1 Yanagido, Gifu 501-1193, Japan) ,  Hirata Yoko (United Graduate School of Drug Discovery and Medical Information Sciences, Gifu University, 1-1 Yanagido, Gifu 501-1193, Japan) ,  Hirata Yoko (Department of Chemistry and Biomolecular Science, Faculty of Engineering, Gifu University, 1-1 Yanagido, Gifu 501-1193, Japan)
資料名： Biochemistry and Biophysics Reports  (Biochemistry and Biophysics Reports)
巻： 12  ページ： 40-45  発行年： 2017年 
JST資料番号： W3090A  ISSN： 2405-5808  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 巨大なN末端及び小C末端領域(NanoBiT),二断片の分割NanoLucアッセイ系は生細胞内の蛋白質-蛋白質相互作用を調べるために開発した。興味深いことに,11個のC末端アミノ酸のうち五アミノ酸の置換は,大きなN末端断片,LgBiTに対する親和性を劇的に増加させ,複合体はNanoLucルシフェラーゼ活性を有していた。本研究では,まず,この小さなフラグメント,HiBiTを適用HiBiT標識AT F4の一時的過剰発現によるATF4蛋白質の発現を明らかにした。固有ATF4蛋白質の調節によると,プロテアソーム阻害剤によるHiBiT標識AT F4の安定化,MG132は,細胞溶解液及びPVDF膜へのSDS-PAGEと移動後のルシフェラーゼ活性を検出することにより観察された。HiBiTエピトープタグCRISPR/Cas9システムを用いたAT F4遺伝子にノックインとは急速に各細胞懸濁液の溶液中のルシフェラーゼ活性を測定することで陽性クローンを選択した。選択されたクローンを用いて,選択した細胞におけるHiBiT標識AT F4の発現は蛋白質合成阻害剤あるいはプロテアソーム阻害剤とツニカマイシンによる処理に応じて変化することを観察した。まとめると,この新規HiBiTタグは,関心のある蛋白質の内因性発現レベルを評価するための有用なツールである。Copyright 2018 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【Powered by NICT】

シソーラス用語： SDS-PAGE ,  *タンパク質 ,  クローン ,  遺伝子 ,  親和性 ,  アミノ酸
準シソーラス用語： プロテアソーム阻害剤 ,  ルシフェラーゼ活性 ,  蛋白質間相互作用 ,  生細胞 ,  C末端 ,  アミノ末端 ,  *蛋白質発現 ,  *活性化転写因子4 ,  *Neuro2A細胞 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： AT F4 ,  CRISPR/Cas9 ,  HiBiT ,  NanoLuc

分類 (1件)： 蛋白質・ペプチド一般  (EB03010N)

タイトルに関連する用語 (7件)： Neuro2A細胞 ,  モニタリング ,  ATF4 ,  蛋白質発現 ,  ペプチド ,  タグ ,  応用