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J-GLOBAL ID：201702230781746391   整理番号：17A1880762

PML-RARα融合遺伝子関連蛋白質原核生物発現ベクターの構築、発現と精製【JST・京大機械翻訳】

Construction, expression, and purification of prokaryotic expression vector for PML-RARα fusion gene related proteins

著者 (6件)： Du Qin (637000 南充,川北医学院附属医院検験科;637000 南充,川北医学院医学検験系;637000 南充,川北医学院転化医学研究中心) ,  Cai Jiajing (637000 南充,川北医学院医学検験系;637000 南充,川北医学院転化医学研究中心) ,  Jiang Chunping (川北医学院医学検験系, 南充,637000) ,  Xu Lei (川北医学院転化医学研究中心, 南充,637000) ,  Zhang Guoyuan (川北医学院附属医院検験科, 南充,637000) ,  Wang Dongsheng (637000 南充,川北医学院附属医院検験科;637000 南充,川北医学院転化医学研究中心)
資料名： Guoji Yiyao Weisheng Daobao  (Guoji Yiyao Weisheng Daobao)
巻： 23  号： 13  ページ： 1998-2001,2025  発行年： 2017年 
JST資料番号： C3822A  ISSN： 1007-1245  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】大腸菌における可溶性蛋白質を発現させるために,PML-RAR(融合遺伝子関連組換え発現プラスミド)を構築し,ポリメラーゼ連鎖反応(Polymerase Chain Reaction)を用いて精製した。PCR法により,PML-RAR αプラスミドをテンプレートとして用い,長さが1200bpのPMLとRAR oを増幅し,それぞれPET32a(+)プラスミドに挿入し,組換え発現プラスミドを構築した。大腸菌DH5αを化学的に形質転換し,コロニーPCRにより陽性形質転換体をスクリーニングした。組換えプラスミドの正しさを,二重酵素消化と配列決定により同定し,組換え型プラスミドを,それぞれ,PML-FlagPET-PET32a(+)とFlagRARα-PET32a(+)と命名し,E.coli(大腸菌)BL21(DE3)に形質転換した。イソプロピルβ-D-ガラクトピラノシド(IPTG)によって誘導された発現を用いて,発現蛋白質のヒスチジン(タグ)(His-tag)を用いてNi2+-樹脂カラムを精製し,精製した。蛋白質をSDS-PAGEとウェスタンブロット法により同定し,PCR増幅により標的遺伝子を得た。組換え型発現プラスミドをEcoRIとHindIIIによる二重酵素消化と配列決定によって確認し,それは,誘導されたBL21(DE3)によって誘導された後に効率的に発現された。これは更なる抗体調製などの実験に基礎を築いた。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *原核生物 ,  プラスミド ,  大腸菌 ,  形質転換 ,  SDS-PAGE ,  *タンパク質 ,  酵素的分解 ,  抗体 ,  PCR法 ,  ウェスタンブロット法
準シソーラス用語： 組換体 ,  組換蛋白質発現 ,  可溶性蛋白質 ,  *発現ベクター ,  *融合遺伝子 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (6件)： PML-RARα fusion gene ,  Recombinant plasmid ,  Protein expression ,  Protein purification ,  Acute promyelocytic leukemia (APL) ,  Antibody preparation

分類 (1件)： 遺伝子発現  (EC02040Q)

タイトルに関連する用語 (7件)： 融合遺伝子 ,  蛋白質 ,  原核生物発現 ,  ベクター ,  構築 ,  発現 ,  精製