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J-GLOBAL ID:201702231532710737   整理番号:17A1684472

ヒト臍帯間充織幹細胞外分泌体による高グルコース誘導臍静脈内皮細胞機能への影響【JST・京大機械翻訳】

Effect of exosomes secreted by human umbilical mesenchymal stem cells on high glucose -induced human um-bilical vascular endothelial cells
著者 (9件):
資料名:
巻: 32  号:ページ: 220-225  発行年: 2017年 
JST資料番号: C2794A  ISSN: 2095-428X  資料種別: 逐次刊行物 (A)
記事区分: 原著論文  発行国: 中国 (CHN)  言語: 中国語 (ZH)
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【目的】高グルコースによって誘導されるヒト臍帯静脈内皮細胞(hUVECs)の機能に及ぼすヒト臍帯間葉系幹細胞(hUMSCs)の影響を調査する。方法:酵素消化法により、hUMSCsとhUVECsを初代培養し、継代培養し、第3世代まで増幅し、フローサイトメトリーにより、それぞれ2種類の細胞表面マーカーを同定した。培養した第3世代のUUMSCsは血清培地を持たない、外分泌体を抽出し、電子顕微鏡下でその超微細構造を観察し、フローサイトメトリーによりその表面マーカーを同定した。in vitroで培養した3つのhUVECsを,対照群,高グルコース群(20mmol/L),高グルコース群(20mmol/L),miR-22阻害剤(50nmol/L)+高グルコース群(20mmol/L)に分けた。24時間の培養後,アネキシンV V/PI二重染色フローサイトメトリーによりhUVECsアポトーシスを観察し,MTT法により各群の細胞増殖能力を観察し,Transwellシステムにおいて各群の細胞移動機能を観察した。血管内皮細胞の機能を,血管形成実験によって検出した。結果:フローサイトメトリーにより、第3世代hUMSCsの表面マーカーCD105、CD73、CD90は高発現を示した。CD3,CD31,およびCD34の発現は,3番目のhUVECsで検出されたが,CD34,CD31およびCD34の発現は高かった。分離培養したhUMSCsとhUVECsが間葉系幹細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)と内皮細胞(endothelial cells,ECSs)の特異的な表現型特徴を有することを提示した。in vitroでの走査型電子顕微鏡(SEM)により,CD63,CD105,CD73,CD90およびCD44の発現を検出し,MTT法により細胞増殖を検出した。対照群、高グルコース群、miR-22抑制剤+高グルコース群、外分泌体+高グルコース群の細胞生存率は、それぞれ(99.0±1.6)%、(75.0±2.2)%、(66.0±1.8)%、(95.0±2.6)%であり、対照群と比較した。高グルコース群およびmiR-22阻害剤+高グルコース群の細胞増殖は有意に減少し,有意差があった(t=28.271,P<0.05;t=43.213,P<0.01)が,外分泌+高グルコース群の細胞増殖は有意に減少しなかった。統計的有意差は認められなかった(t=2.001,P>0.05)。フローサイトメトリーを用いて,各群の細胞アポトーシスを検出した。対照群、高グルコース群、miR-22抑制剤+高グルコース群、外分泌体+高グルコース群の細胞アポトーシス率はそれぞれ16.44%、52.67%、45.92%、17.58%であり、対照群と比較して、高糖群とmiR-22抑制剤+高グルコース群のアポトーシス率は明らかに上昇した。統計的有意差が認められた(t=-13.756,-16.489,P<0.01)が,高グルコース群の細胞アポトーシス率はわずかに増加した。> P<0.01 。> P<0.01 であった(P < 0.01)。細胞の移動機能は,Transwellシステムにおいて観察されなかった(t=-2.182,P>0.05)。対照群、高グルコース群、miR-22抑制剤+高グルコース群、外分泌体+高グルコース群の細胞移動数はそれぞれ834.5個、295.8個、252.2個、779.5個であり、対照群と比較した。高グルコース群とmiR-22阻害剤+高グルコース群の細胞移動量は明らかに減少し、統計学的有意差が認められた(t=18.280、27.266、いずれもP<0.01)、外分泌体+高グルコース群の細胞移動量はわずかに減少した。統計的有意差は認められなかった(t=1.985,P>0.05)。in vitroでの実験結果は,以下の通りであった。対照群、高グルコース群、miR-22抑制剤+高グルコース群、外分泌+高グルコース群の細胞管形成数はそれぞれ29.8、13.3、11.3、29.6であり、対照群と比較して、高糖群とmiR-22抑制剤+高グルコース群の細胞管形成数は明らかに減少した。2群間に有意差があった(t=9.030,P<0.05;t=10.671,P<0.01),そして,外分泌+高グルコース群の細胞数は,わずかに減少した(t=0.083,P>0.05)。結論:hUMSCs外分泌体は高グルコース誘導hUVECsのアポトーシスを有効に抑制し、細胞増殖、移動と血管再生作用を促進し、糖尿病微小血管病変治療の新しい標的を探すために実験的根拠を提供する。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】
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