抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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【目的】強力な鎮痛効果,安全性,無呼吸抑制,および中毒性などの利点を有する強いペプチドは,現在の生物学的鎮痛の研究の焦点であると考えられている.。・・・.は,生物学的鎮痛の研究における重要な役割を果たしている。本研究では,骨髄間葉系幹細胞(BM-MSCs)におけるレンチウイルスによって媒介されるラット前の強いファルファリン(PDYN)遺伝子の発現を研究し,その後の癌性疼痛モデルの生物学的鎮痛のための条件を提供した。方法:接着スクリーニング法を用いてBM-MSCsを分離し、増殖させ、フローサイトメトリーと体外脂肪形成、骨芽細胞誘導分化実験により同定した。PDYNのレンチウイルスベクターを構築し,BM-MSCsに感染させ,倒立蛍光顕微鏡下で緑色蛍光蛋白質の発現を観察し,Western blot法により最適感染の複数(MOI)をスクリーニングした。実験群は,ブランク群(BM-MSCs),実験群(PCDH-CMV-PDYN-EF1-co-GFP),空ベクター群(PCDH-CMV-MCS-EF1-co-pGFP)に分けた。PDYNの発現をリアルタイム蛍光定量的ポリメラーゼ連鎖反応(qPCR)とウエスタンブロットによって検出し,免疫組織化学的染色によって強いファシンの蛋白質発現を検出するために免疫組織化学的染色を行った。結果:BM-MSCsは長い紡錘形線維芽細胞様成長を呈し、CD29、CD44、CD90を多数発現し、少数のCD45を発現した。脂質誘導培養後のオイルレッドO染色は陽性であった。骨形成誘導培養後にミネラル化結節が出現し、アリザリンレッド染色により、赤色の赤色を呈した。フローサイトメトリーの結果,CD29,CD90,CD44,CD45の陽性率は,それぞれ(99.80±0.19)%,(99.62±0.24)%,(96.86±1.27)%,(0.82±0.06)%であった。PDYN遺伝子をトランスフェクションしたBM-MSCsの表面マーカーCD29,CD90,CD44,CD45の陽性率は,それぞれ(99.59±0.34)%,(98.06±1.51)%,(95.23±0.71)%,(10.23±0.59)%であった。トランスフェクション前後のBM-MSCsの幹細胞の特性には有意差がなかった(P>0.05)。PCR増幅により,組換え型レンチウイルスベクターPCDH-CMV-PDYN-EF1-copGFPの構築に成功し,組換え型レンチウイルスの力価は5×106IU/mLであった。緑色蛍光蛋白質の発現とWestern blotの結果によると、レンチウイルスMOI=100が最適なウイルス感染の複数であり、qPCR、West-blot blotによって、レンチウイルスベクターで感染したBM-MSCsにおけるPDYN遺伝子の発現はいずれも上昇した(P<0.05)。免疫細胞化学染色により、強いエンケファリン蛋白の発現が著しく増強されたことが示された。【結論】BM-MSCsの構築に成功し,PDYN遺伝子を過剰発現させることによって,PDYN遺伝子を分泌することができ,強いファルネチン蛋白質を分泌することができる。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】
