TEVプロテアーゼ変異体を用いたアフィニティー樹脂上での融合蛋白質の開裂【Powered by NICT】

Zhu Kejun; Zhou Xuan; Yan Yanping; Mo Hongmei; Xie Yifan; Cheng Beijiu; Fan Jun

文献

J-GLOBAL ID：201702235647232533 整理番号：17A1175343

TEVプロテアーゼ変異体を用いたアフィニティー樹脂上での融合蛋白質の開裂【Powered by NICT】

Cleavage of fusion proteins on the affinity resins using the TEV protease variant

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資料名：
巻： 131 ページ： 27-33 発行年： 2017年
JST資料番号： W0282A ISSN： 1046-5928 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：オランダ (NLD) 言語：英語 (EN)

タバコエッチ病ウイルスプロテイナーゼ(TEVp)変異体TEVp~3mは,比較的低い温度でNi-NTA樹脂に結合した融合蛋白質の切断において効率的であることが知られている。ここでは,Ni-NTAまたはStrep tactinアガロースに結合したGFP融合基質を用いて,TEVp~5m変異体の活性は他のTEVp構築物のそれよりも高く,TEVp~3mのそれよりも約15%高いことを明らかにした。Strep tactinアガロースまたはグルタチオンセファロース上に固定化されたGST融合蛋白質は主にビジュアルな情報と検出のためのGFPレポーターを用いた特定条件下での精製TEVp~5mまで効率的に開裂した。同族TEVp~5m構築物を用いた三融合構築物のオンカラム切断後,比較的高純度の二標的蛋白質はNi-NTAまたはアミロースアガロースから分離した。1M NaClを含む緩衝液の溶出により,トウモロコシスルフィレドキシンはオンカラム開裂によるNi-NTA樹脂から放出された。著者らの結果は,TEVp~5mは四アフィニティーマトリックスに結合した融合蛋白質を効率的に開裂することを確認した。適切な親和性ハンドルとの組合わせにより,同族TEVp~5m媒介タグ除去は融合蛋白質の精製と開裂,プロテアーゼの除去,及び一段階で達成される親和性樹脂からの標的蛋白質の分離を可能にした。Copyright 2017 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【Powered by NICT】

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遺伝子操作

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