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J-GLOBAL ID：201702242425818438   整理番号：17A1575137

ヒトサイトケラチン1遺伝子のクローニング,原核発現および精製【JST・京大機械翻訳】

Cloning, prokaryotic expression and purification of human cytokeratin 1

著者 (8件)： Wang Bo (西安交通大学第一附属医院転化医学中心,西安710061;西安交通大学医学部基礎医学院生物化学与分子生物学系;陜西省腫瘤精准医学重点実験室) ,  Hou Weikun (西安交通大学医学部附属紅会医院関節病医院骨坏死与関節重建病区) ,  Zhou Yan (西安交通大学第一附属医院皮膚科) ,  Cai Yongsong (西安交通大学医学部基礎医学院生物化学与分子生物学系) ,  Wang Linyu (西安交通大学第一附属医院転化医学中心,西安710061;陜西省腫瘤精准医学重点実験室) ,  Zhang Ying (西安交通大学第一附属医院消化内科) ,  Han Yan (西安交通大学医学部基礎医学院生物化学与分子生物学系) ,  Meng Liesu (西安交通大学医学部基礎医学院生物化学与分子生物学系)
資料名： Shanxiyike Daxue Xuebao  (Shanxiyike Daxue Xuebao)
巻： 48  号： 2  ページ： 114-119  発行年： 2017年 
JST資料番号： C3514A  ISSN： 1007-6611  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】ヒトサイトケラチン1(CK1)をクローニングし,原核生物発現系により融合蛋白質を発現させ,精製し,同定する。【方法】RT-PCR法により,ヒトケラチン細胞からRNAを抽出し,RT-PCRによりcDNAを増幅し,特異的プライマーを用いてヒトCK1コード領域(NM_006121.3)を増幅した。EcoR IとHindIIIの二重消化酵素PCR産物とpET-28aベクターを用いて、T4 DNAリガーゼによりヒトCK1コード領域の全長遺伝子をpET-28aベクターにクローンし、IPTGにより融合タンパクhis-KC1の発現を誘導した。融合蛋白質をNi2+親和性クロマトグラフィーにより精製し,SDS-PAGEとWestern blotにより同定した。結果:配列決定により、発現ベクター中のヒトCK1配列が正確であることが明らかになった。融合蛋白質his-KC1の相対分子量は70kDであり,大腸菌において効率的に発現した。融合蛋白質を封入体の形で変性し,融合蛋白質his-KC1を精製し,純度は90%以上であった。精製された融合蛋白質his-CK1は,CK1抗体およびHis抗体と特異的に結合することができた。【結論】原核生物発現プラスミドpET-28a-KC1の構築に成功し,融合蛋白質his-CK1の発現と精製に成功した。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 大腸菌 ,  *ヒト ,  プラスミド ,  SDS-PAGE ,  封入体 ,  *遺伝子 ,  融合タンパク質 ,  RNA【核酸】 ,  ベクター ,  RT-PCR法 ,  抗体 ,  アフィニティークロマトグラフィー ,  cDNA
準シソーラス用語： カゼインキナーゼI ,  *クローニング , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： cytokeratin 1 ,  gene cloning ,  fusion protein ,  prokaryotic expression system

分類 (1件)： 遺伝子の構造と化学  (EC02020U)

タイトルに関連する用語 (6件)： ヒト ,  ケラチン1 ,  遺伝子 ,  クローニング ,  発現 ,  精製