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J-GLOBAL ID：201702243684244791   整理番号：17A1677705

DEC1遺伝子shRNAのレンチウイルス発現ベクターの構築とその安定した神経膠腫細胞系の確立【JST・京大機械翻訳】

Construction of shRNA lentiviral expression vector of DFC1 gene and establishment of its stable transfection glioma cell line

著者 (7件)： Wei Xuehui (第四軍医大学西京医院神経外科,陜西西安,710032) ,  Li Xiaoming (第四軍医大学西京医院神経外科,陜西西安,710032) ,  Zhang Yao (第四軍医大学西京医院神経外科,陜西西安,710032) ,  Ru Yi (第四軍医大学基礎部生物化学与分子生物学教研室,陜西西安,710032) ,  Wang Qinhao (第四軍医大学基礎部生物化学与分子生物学教研室,陜西西安,710032) ,  Li Xia (第四軍医大学基礎部生物化学与分子生物学教研室,陜西西安,710032) ,  Lin Wei (第四軍医大学西京医院神経外科,陜西西安,710032)
資料名： Zhonghua Shenjing Waike Jibing Yanjiu Zazhi  (Zhonghua Shenjing Waike Jibing Yanjiu Zazhi)
巻： 16  号： 1  ページ： 15-19  発行年： 2017年 
JST資料番号： C3888A  ISSN： 1671-2897  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 目的:ヒト分化型胚性軟骨形成遺伝子1(DEC1)の短いヘアピンRNA(shRNA)のレンチウイルス発現ベクターを構築し、安定的にDEC1発現を減少させるヒト神経膠腫細胞株T98Gを樹立する。【方法】GenBankにおけるDEC1遺伝子のcDNA配列に従って,2つの特異的shRNA配列を設計し,同時に非特異的配列を設計し,陰性対照として設計し,Psi-LVRU6MPプラスミドにクローン化した。制限酵素電気泳動とDNA配列決定により、レンチウイルス粒子を包装した。さらに、3組のレンチウイルスにより神経膠腫細胞株T98Gを感染させ、ピューロマイシンでスクリーニングした後、蛍光顕微鏡下でmCherryの発現を観察し、Western Blotで各群のDEC1タンパクの発現レベルを測定した。結果:DEC1遺伝子shRNAのレンチウイルス発現ベクターは制限酵素消化、配列決定により、クローンが正しいことが確認された。蛍光顕微鏡検査により、各群の細胞はいずれもレンチウイルスにより効率的に感染され、Western Blotの結果により、両干渉群の細胞におけるDEC1タンパク発現レベルは未処理群と陰性対照群より明らかに低いことが示された。それらは,未処置群の39.47%±0.69%と41.17%±0.89%(P<0.05)を占めたが,2群間に有意差はなかった(P>0.05)。陰性対照群と未処置群との間には有意差がなかった(P>0.05)。結論:DEC1遺伝子shRNAのレンチウイルス発現ベクターを構築することに成功し、神経膠腫T98G細胞株を感染させることに成功した。2つの干渉群のレンチウイルスは明らかに標的遺伝子DEC1の発現を減少させることができ、さらに、DEC1が神経膠腫細胞株T98Gにおける生物学的機能と作用機序を研究するための実験的基礎を提供した。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： ヒト ,  タンパク質 ,  *遺伝子 ,  クローン ,  蛍光顕微鏡 ,  プラスミド ,  DNA制限酵素 ,  *レンチウイルス ,  *RNA【核酸】 ,  *神経膠腫 ,  電気泳動
準シソーラス用語： DNA配列 ,  *発現ベクター ,  *低分子ヘアピンRNA ,  *DEC1蛋白質 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： DEC1 gene ,  Short hairpin RNA ,  Lentiviral expression vector ,  Glioma

分類 (3件)： 遺伝子発現  (EC02040Q) ,  ウイルスの生化学  (EG04030F) ,  遺伝子の構造と化学  (EC02020U)

タイトルに関連する用語 (8件)： DEC1 ,  遺伝子 ,  shRNA ,  レンチウイルス ,  発現ベクター ,  構築 ,  神経膠腫 ,  細胞系