抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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背景水晶体後嚢膜混濁(PCO)は嚢胞外白内障摘出術後の主要な合併症であり、その発症機序は水晶体上皮細胞(LECs)の増殖、移行と上皮-間質形質転換(EMT)に関連し、関連する予防と標的治療措置を検討することは極めて重要である。【目的】ヒトLECsの増殖とアポトーシスに及ぼすSmacの効果を調査して,PCOの生物学的機能を調査する。そして,それらの生物学的役割を調査するために,それらの役割を調査する。方法:HLE-B3細胞株とSmac過剰発現ヒトLECs株を培養し、培養したHLE-B3細胞をPBS群、空プラスミドトランスフェクション群とsiRNA-Smac3トランスフェクション群に分けた。siRNA-Smac3プラスミドのトランスフェクション効率は,PBS,空のプラスミド,および強化緑色蛍光蛋白質(GFP)を含むsiRNA-Smac3プラスミドによって,24時間にトランスフェクションされた後に計算された,そして,siRNA-Smac3プラスミドのトランスフェクション効率は,それぞれ,トランスフェクションされた細胞において検出された。種々の濃度(5,10,20および50μg/ml)のTGF-β2または200μmol/LのH2O2を,細胞培養液に加えて,PCOモデルまたは酸化ストレスのアポトーシスモデルを確立した。細胞をPBS群,TGF-β2群およびSmac過剰発現+TGF-β2群に分け,細胞増殖活性を細胞計数キット-8(CCK-8)により測定した。細胞をPBS群、H2O2群とsiRNA-Smac+H2O2群に分け、フローサイトメトリーを用いて各群の細胞アポトーシス率を測定した。Smac,カスパーゼ-3,および増殖細胞核抗原(PCNA)mRNAと蛋白質の相対的発現を,リアルタイム定量的PCRとウエスタンブロット法によってそれぞれ検出した,そして,それらの相対的な発現は,それぞれ,検出された,そして,細胞増殖は,ウェスタンブロット法によって検出された。【結果】siRNA-Smac3プラスミドによるトランスフェクションの後,GFP陽性細胞は80%以上に達した。siRNA-Smac3-siRNA-Smac3トランスフェクション群におけるGFP陽性細胞の比率は,(72.32±2.31)%で,空のプラスミド群のそれより有意に高かった(4.91±0.24)%。。05%,P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.05)。LECsにおけるSmac mRNAの相対的発現は,35.21±4.11であり,空のプラスミドによる15.24±2.48より高かった(t=116.342,P<0.001)。【結果】PBS群,TGF-β2群,およびSmac過剰発現+TGF-β2群の細胞増殖率は,それぞれ,(98.4±1.7)%,(98.9±0.1)%,および(64.2±3.1)%であった(t=215.47,P<0.05)。Smac過剰発現+TGF-β2群はTGF-β2群より明らかに低かった。PBS群,H2O2群,およびsiRNA-Smac+H2O2群におけるアポトーシス率は,それぞれ(2.9±1.2)%,(45.1±4.5)%,および(27.5±1.8)%であった(P<0.05)ことが,有意差があった(P<0.05)。siRNA-Smac+H2O2群におけるアポトーシス率は,H2O2群におけるそれらより有意に低かった(P<0.05)。蛍光定量PCRの結果は,PBS群,H2O2群,およびsiRNA-Smac+H2O2群におけるカスパーゼ-3mRNAの相対的発現が,それぞれ0.321±0.103,0.715±0.112,および0.479±0.209であることを示した。siRNA-Smac+H2O2群におけるカスパーゼ-3mRNAの相対的発現は,H2O2群におけるそれより有意に低かった(P<0.05)が,対照群におけるそれらより有意に低かった(P<0.05)。PBS群,TGF-β2群およびSmac過剰発現+TGF-β2群におけるPCNA mRNAの相対的発現は,それぞれ0.299±0.013,0.645±0.102および0.490±0.209であり,TGF-β2群のそれらと比較して有意に高かった(P<0.05)。Smac過剰発現+TGF-β2群におけるPCNA mRNAの相対的発現は,有意に減少した(P<0.05)が,ウェスタンブロット法によって示された(P<0.05)。カスパーゼ-3蛋白質発現は,siRNA-Smac+H2O2群およびH2O2群において0.712±0.012および0.973±0.051であった。siRNA-Smac+H2O2群におけるカスパーゼ-3蛋白質の相対的発現は,H2O2群におけるそれより有意に低かった(t=132.52,P<0.05)。Smac過剰発現+TGF-β2群およびTGF-β2群におけるPCNAの相対的発現量は0.782±0.212,相対的発現量は1.126±0.251,Smac+TGF-β2群のTGF-β2発現はTGF-β2群より有意に低かった。統計的有意差が認められた(P<0.05)。結論:Smac遺伝子はヒトLEC細胞株HLE-B3細胞の増殖を抑制し、細胞アポトーシスを促進し、それはPCOの予防と治療に用いられる可能性がある。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】
