抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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【目的】悪性黒色腫に対するインターロイキン-2(IL-2)遺伝子トランスフェクションによって誘導されるキラー細胞(CIK)の殺傷能力を調査する。方法:マウス脾臓細胞を抽出し、リンパ球を分離し、CIK細胞を培養し、IL-2を持つプラスミドPEGF-N1-IL-2を用いてCIK細胞をトランスフェクションし、蛍光顕微鏡でプラスミドのトランスフェクション状況を観察し、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)でIL-2遺伝子の発現を同定した。エフェクター細胞(CIK細胞またはIL-2をCIK細胞にトランスフェクション)と標的細胞(B16黒色腫細胞)をそれぞれ10:1、20:1と40:1の混合培養により、4hの乳酸脱水素酵素の放出測定法を用いた。2種類のCIK細胞のB16細胞に対する細胞毒性活性を測定した。2つのCIK細胞におけるIL-2,インターフェロンγ(IFN-γ)および腫瘍壊死因子α(TNF-α)のレベルを,酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)によって検出した。マウス黒色腫モデルを確立し,28匹のマウスを4つの群に分けた。対照群(0.2mlの生理食塩水溶液),IL-2群(腫瘍の傍注射100U IL-2),CIK群(腫瘍傍注射細胞数約1×106 CIK細胞懸濁液),IL-2トランスフェクションCIK群(腫瘍傍注射細胞数約1×106 IL-2)をCIK細胞懸濁液にトランスフェクションした。腫瘍の形態学と腫瘍抑制率、細胞アポトーシス率により担癌マウスの腫瘍生長状況を評価する。両群の正規分布の測定データの比較によりt検定を行い、多群の計量資料の比較は分散分析を採用し、両群間の多重比較はLSD-t検定を採用した。【結果】蛍光顕微鏡とRT-PCRは,IL-2がCIK細胞のトランスフェクションに成功したことを示した。実験結果は,IL-2によってトランスフェクションしたCIK細胞が,B16細胞に対して最も強い毒性を持つことを示した。IL-2によるIL-2のトランスフェクションは,IL-2(1107.26±6.49pg/ml),IFN-γ(50.01±3.35pg/ml)とTNF-α(39.86±3.25pg/ml)の発現を有意に増加させた(それぞれ,51.09±3.85,32.71±2.43,30.11±3.08pg/ml)。2つの群の間で,t値は,それぞれ442.60,14.93,および6.89であり,統計的有意差があった(P<0.01)。動物実験によると、介入前と比べ、介入後の対照群マウスの腫瘍体積は明らかに増大し(P<0.05)、IL-2群、CIK群とIL-2トランスフェクションCIK群のマウスの腫瘍体積は明らかに減少した(P<0.001)。IL-2によってトランスフェクションしたCIK群の腫瘍容積は,他の3つの群(P<0.01)におけるそれらより有意に低かった。IL-2群とCIK群の間には有意差がなかった(P>0.05)が,CIK群,IL-2群,およびIL-2群におけるアポトーシス率は,対照群におけるそれらより有意に高かった(P<0.01)。IL-2群とCIK群におけるアポトーシス率と腫瘍抑制率は,IL-2群とCIK群より有意に高かった(P<0.01)が,IL-2群とCIK群のアポトーシス率と腫瘍抑制率には有意差はなかった(P>0.05)。結論:IL-2によるCIK細胞のトランスフェクションは悪性黒色腫に対してより強い殺傷作用がある。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】
