抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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【目的】miR-145標的遺伝子を同定し,miR-145による結腸直腸癌細胞株HCT116オキサリプラチン(L-OHP)に対する抵抗性を阻害する機序を調査する。【方法】ヒト結腸直腸癌細胞株HCT116に基づいて,ヒト結腸直腸癌細胞株HCT116/L-OHPを確立した。リポフェクタミン2000を用いて,miR-145の模倣体miRNA-mimicsと陰性対照NC-miRNAを,HCT116/L-OHPに形質移入した。miR-145を過剰発現させた細胞株HCT116/L-OHPmimicsとその陰性対照HCT116/L-OHPNCを得た。miR-145の標的遺伝子を予測し、ルシフェラーゼ法により検証した。標的蛋白質がGタンパク質共役受容体98(GPR98)によって構築された後,プラスミドを構築し,GPR98を過剰発現させたHCT116/L-OHPGPR98細胞および対照HCT116/L-OHPcontrolを得た。同時に、GPR98 cDNA中にmiR-145と結合した配列を変更することで、GPR98とmiR-145を同時に過剰発現するHCT116/L-OHPmimics+GPR98細胞を得た。本研究ではCCK-8法を用いて細胞の増殖能力[吸光値(A)]値とL-OHPへの感受性(被測定拮抗剤の半抑制濃度IC50が低いほど、薬物に対する敏感性が強い)を測定した。リアルタイムPCRを用いて,miR-145とGPR98のmRNA発現を検出した。ウェスタンブロット法を用いて,GPR98と薬剤耐性関連蛋白質P-糖蛋白質(P-gp),多剤耐性蛋白質1(MRP1),および癌抑制遺伝子PTENの蛋白質発現を検出した。【結果】HCT116/L-OHP(IC50:(42.34±1.05)μg/ml)はHCT116細胞(9.81±0.95)μg/ml,t=39.784,P=0.000,miR-145:0.27±0.04,HCT116細胞の1.00±0.09,t=13.021,P=0.000より高かった。HCT116/L-OHPに基づいて,以下の結果を得た。HCT116/L-OHPmimics細胞(miR-145:10.01±1.05,HCT116/L-OHPNC(1.06±0.14)およびHCT116/L-OHP(1.00±0.16),F=161.797,P=0.000),GPR98/L-OHPGPR98細胞におけるGPR98のmRNAおよび蛋白質発現は,それぞれ8.48±0.46および1.71±0.09であった。HCT116/L-OHPcontrol(mRNA:3.65±0.40;蛋白質:1.21±0.10)およびHCT116/L-OHP(mRNA:3.49±0.35;蛋白:1.22±0.08)と比較した。HCT116/L-OHPGPR98細胞におけるA450値は1.31±0.10,HCT116/L-OHP(0.82±0.08,t=6.251,P=0.000)より有意に高かった(P<0.05)。HCT116/L-OHPmimics+GPR98細胞のA450値は0.89±0.08であった。HCT116/L-OHPmimics(0.20±0.05,t=11.158,P=0.000)より高いHCT116/L-OHPGPR98細胞におけるP-gpとMRP1の相対的発現レベルは,それぞれ1.53±0.18と1.49±0.20であった。HCT116/L-OHP細胞(それぞれ1.00±0.06と1.21±0.13)より高く、癌抑制蛋白PTENの相対発現レベルは0.12±0.03で、HCT116/L-OHP細胞(1.25±0.14)より低かった。【結果】HCT116/L-OHPmimics+GPR98細胞におけるP-gpとMRP1蛋白質の相対的発現は,それぞれ1.02±0.24と1.38±0.25であった(すべてのP<0.05)ことが,有意差を示した(P < 0.05)ことが示された(P < 0.05)ことが示された(P<0.05)。HCT116/L-OHPmimics(それぞれ0.20±0.07と0.55±0.10)より高く,PTEN蛋白質の相対的発現レベルは1.41±0.16であった。HCT116/L-OHPmimics(1.98±0.13)より低い(P<0.05),HCT116/L-OHPGPR98IC50は(73.54±1.21)μg/mlであった。それは,HCT116/L-OHP(41.25±1.56)μg/mlより高かった(t=25.041,P=0.000)。HCT116/L-OHPmimics+GPR98IC50は,(48.80±1.75)μg/mlであった。それは,HCT116/L-OHPmimics(19.20±0.81)μg/mlより高かった(t=22.994,P=0.000)。結論:miR-145は標的遺伝子GPR98の発現レベルを抑制することによって、ヒト結腸直腸癌細胞株HCT116細胞のL-OHP耐性を抑制することができる。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】
