文献

J-GLOBAL ID：201702259462992770   整理番号：17A1118037

直接geneFISH:微生物における遺伝子とrRNAの同時検出と定量化のための簡略化プロトコル【Powered by NICT】

Direct-geneFISH: a simplified protocol for the simultaneous detection and quantification of genes and rRNA in microorganisms

著者 (5件)： Barrero-Canosa Jimena (Department of Molecular Ecology, Max Planck Institute for Marine Microbiology, Celsiusstr. 1, Bremen, D-28359, Germany) ,  Moraru Cristina (Department of Biology of Geological Processes, Institute for Chemistry and Biology of the Marine environment (ICBM), Carl-von-Ossietzky-Strasse 9-11, Oldenburg, D-26111, Germany) ,  Zeugner Laura (Department of Molecular Ecology, Max Planck Institute for Marine Microbiology, Celsiusstr. 1, Bremen, D-28359, Germany) ,  Fuchs Bernhard M. (Department of Molecular Ecology, Max Planck Institute for Marine Microbiology, Celsiusstr. 1, Bremen, D-28359, Germany) ,  Amann Rudolf (Department of Molecular Ecology, Max Planck Institute for Marine Microbiology, Celsiusstr. 1, Bremen, D-28359, Germany)
資料名： Environmental Microbiology  (Environmental Microbiology)
巻： 19  号： 1  ページ： 70-82  発行年： 2017年 
JST資料番号： W2561A  ISSN： 1462-2912  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： アメリカ合衆国 (USA)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 特異的リボソームRNA(rRNA)標的オリゴヌクレオチドを用いた蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)は,微生物の検出と同定のための標準法であるが,例えばgeneFISHを用いて,細菌及び古細菌における遺伝子の特異的検出は,複雑で長い(>30 h)手順を必要とする。ここでは,直接geneFISH,非常に改良されたプロトコル6以内で特異的遺伝子とrRNA検出を可能にすることを報告した。直接geneFISHに対して,触媒増幅レポーター堆積(CARD)ステップを除去し,蛍光色素標識ポリヌクレオチド遺伝子プローブとrRNAを標的としたオリゴヌクレオチドプローブを同時にハイブリッド化した。プロトコルは細胞当りの遺伝子コピー数の定量化を可能にし,直接標識プローブのシグナルは,rRNA及び標的遺伝子の細胞内局在性を可能にした。直接geneFISHの検出効率は第一コピー制御ベクトルに標的遺伝子を持つ大腸菌で評価した。遺伝子コピー数は細胞内geneFISH信号と相関することを示すことができた。新しいプロトコルは,Rogoznica湖(クロアチアにおけるガンマプロテオバクテリアクレードSUP05の細胞における硫酸thiolhydrolase(soxB)遺伝子の検出に適用した。直接geneFISHによる細胞・遺伝子検出効率は統計的に元のgeneFISHで得られたものと同じであり,環境試料のための簡単かつ迅速プロトコルの適合性を実証した。Copyright 2017 Wiley Publishing Japan K.K. All Rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【Powered by NICT】

シソーラス用語： コピー数 ,  プローブ ,  蛍光 ,  古細菌 ,  大腸菌 ,  *遺伝子 ,  環境試料 ,  *プロトコル ,  *FISH ,  *rRNA ,  検出効率 ,  オリゴヌクレオチド ,  標的遺伝子 ,  オリゴヌクレオチドプローブ ,  蛍光色素 ,  微生物

分類 (3件)： 微生物検査法  (EG02020G) ,  微生物形態学・分類学  (EG03030Y) ,  遺伝学研究法  (EC01020N)

タイトルに関連する用語 (7件)： 微生物 ,  遺伝子 ,  rRNA ,  同時検出 ,  定量化 ,  簡略化 ,  プロトコル