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J-GLOBAL ID：201702260287070774   整理番号：17A1855513

ヒトSpsb1遺伝子レンチウイルスベクターの構築とウイルスパッケージング【JST・京大機械翻訳】

Construction of Lentivirus shRNA Interference Vector of Human Spsb1 Gene and its Lentivirus Particle Packaging

著者 (8件)： Sun Daquan (貴州医科大学基礎医学院,貴州貴陽,550025) ,  Shi Song (貴州医科大学基礎医学院,貴州貴陽,550025) ,  Xu Yingying (貴州医科大学基礎医学院,貴州貴陽,550025) ,  Lei Tingwen (貴州医科大学基礎医学院,貴州貴陽,550025) ,  Mo Xiaochuan (貴州医科大学基礎医学院,貴州貴陽,550025) ,  Wang Zhuting (貴州医科大学基礎医学院,貴州貴陽,550025) ,  Li Hongmei (貴州医科大学基礎医学院,貴州貴陽,550025) ,  Xu Guoqiang (貴州医科大学基礎医学院,貴州貴陽,550025)
資料名： Guizhou Yike Daxue Xuebao  (Guizhou Yike Daxue Xuebao)
巻： 42  号： 6  ページ： 621-625  発行年： 2017年 
JST資料番号： C3568A  ISSN： 2096-8388  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 目的;ヒトSpsb1遺伝子のshRNAレンチウイルス干渉ベクターを構築し、この遺伝子が肝癌細胞の成長、増殖、転移と浸潤における作用を研究するために、前期の基礎を築いた。方法;shRNAの設計原理に従い,shRNAと陰性対照shRNAを設計し,DNA二本鎖中の二本鎖を化学合成し,アニーリングとペアリング後にレンチウイルス干渉ベクターLV-3(pGLVH1/GFP+Puro)と連結した。陽性クローンは,LV3-SPsb1配列によって同定された。LV293T細胞をLV3-Spsb1とpCMV-delta8.91/pCMV-VSVGによって共トランスフェクションし,トランスフェクションの24時間後に蛍光顕微鏡下でトランスフェクション効率を観察した。トランスフェクション後に収集したウイルス液を用いて肝癌細胞SMMC-7721を感染させ、蛍光顕微鏡下で細胞の蛍光を観察した。1mg/Lのピューロマイシンで感染させない細胞を殺し、Western blotで細胞内在性Spsb1遺伝子の発現量を測定した。結果;配列決定により得られたLV3-Spsb1プラスミドは、必要な目的のレンチウイルスshRNA干渉ベクターであることが証明された。HEK293T細胞への共トランスフェクションにより,細胞は蛍光顕微鏡の下で明るい緑色蛍光を示し,細胞トランスフェクション効率が高いことを示した。ウイルス液がSMMC-7721に感染した後、細胞内に緑色蛍光が出現し、共トランスフェクションシステムはshRNA-Spsb1組換え型レンチウイルス粒子を成功裏に包装できることが証明された。Western blotの結果により、shRNA-Spsb1組換えレンチウイルスは細胞内Spsb1遺伝子の発現を抑制でき、shRNA-Spsb1は肝癌細胞内在性Spsb1遺伝子発現を低下させ、後期の遺伝子機能研究に用いることができることが証明された。結論;ヒトSpsb1遺伝子のレンチウイルスshRNA干渉ベクターLV3-Spsb1を構築し、そのレンチウイルス粒子を包装した。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： プラスミド ,  *レンチ ,  蛍光顕微鏡 ,  *レンチウイルス ,  *ヒト ,  *ベクター ,  トランスフェクション ,  干渉 ,  *遺伝子 ,  遺伝子発現 ,  蛍光 ,  DNA【核酸】 ,  化学合成
準シソーラス用語： 肝癌細胞 ,  低分子ヘアピンRNA , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： liver neoplasms ,  lentiviral interference vector ,  liposomes ,  transfection ,  Spsb1 gene

分類 (2件)： 遺伝子発現  (EC02040Q) ,  遺伝子操作  (EC02050B)

タイトルに関連する用語 (5件)： ヒト ,  遺伝子 ,  レンチウイルスベクター ,  構築 ,  ウイルスパッケージング