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J-GLOBAL ID：201702260597784201   整理番号：17A1290146

ヒトのミネラル化蛋白質-1組換えアデノウイルスの骨形成作用とその分子機構【JST・京大機械翻訳】

Osteogenesis and molecular mechanism of recombinant adenovirus expressing human LIM mineralization protein-1

著者 (6件)： Wang Xiuli (450052,鄭州大学第一附属医院骨科) ,  Cui Fuai (山東大学医学院生化与分子生物学系, 済南,250012) ,  Yin Li (450052,鄭州大学第一附属医院骨科) ,  Wang Yisheng (450052,鄭州大学第一附属医院骨科) ,  Jiang Lindong (450052,鄭州大学第一附属医院骨科) ,  Li Deng (450052,鄭州大学第一附属医院骨科)
資料名： Zhonghua Shiyan Waike Zazhi  (Zhonghua Shiyan Waike Zazhi)
巻： 34  号： 3  ページ： 452-455  発行年： 2017年 
JST資料番号： C2337A  ISSN： 1001-9030  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 目的:pAdEasyアデノウイルスベクターシステムを用いて、ヒトLIMタンパク質-1(LMP-1)組換えアデノウイルスを構築し、in vitroでラット骨髄間質幹細胞(BMSCs)を培養する骨形成促進作用を測定し、その分子機序を分析する。方法:ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)法を用いてヒトLMP-1全長遺伝子を増幅し、pShuttle-IRES-hrGFP-1に挿入し、アデノウイルスシャトルシャトルプラスミドpS-LMP-1-GFPを構築し、DH5a大腸菌に転化した。細菌の単クローンを選択し,制限酵素消化とDNA配列決定を行った。組換え型アデノウイルスベクター(pAdLMP-1-GFP)を,BJ5183細胞において,pS-LMP-1-GFPとプラスミドpAdEasy-1によって,相同組換えによって,得た。 LMPl-1遺伝子を含む組換えアデノウイルスベクター(pAdLMP-1-GFP)を得た。組換えアデノウイルスAd-LMP-1-GFPを,Pac Iによる長い末端反復配列によって,リポフェクタミン2000によって,Ad293細胞に形質移入した後に,組換え型アデノウイルスAd-LMP-1-GFPを得るために,組換え型プラスミドによってトランスフェクションした。アデノウイルスをキャリアとし、ヒトLMP-1遺伝子を体外で第3世代のラットBMSCsにトランスフェクションし、LMP-1遺伝子のBMSCsの発現を測定し、トランスフェクション後の実験群と対照群のアルカリホスファターゼ活性の変化を観察した。オステオカルシン(OCN)およびβ-カテニン(β-カテニン)の発現をウエスタンブロット法により検出し,LMP-1遺伝子の骨形成能および分子機構を評価した。【結果】ヒトLMP-1遺伝子を成功裏に取得し,組換え型アデノウイルス(LMP-1)はBMSCsにおいて効率的に発現し,BMSCsのアルカリホスファターゼ活性は対照群と比較して有意に増加した(P=0.000)。それらは,それぞれ0.096,0.116,0.118,0.119(0.110±0.011),0.045,0.057,0.056,0.054(0.053±0.005)であった。オステオカルシンの発現は,対照群と比較して有意に増加し,それぞれ,0.661,0.767,0.651(0.693±0.064),0.177,0.290,0.222(0.229±0.050)であった。β-カテニンの発現は,対照群と比較して有意に増加し,それぞれ,0.841,0.806,0.867(0.838±0.030),0.185,0.236,0.266(0.229±0.040)であった。【結論】組換えアデノウイルスベクターをpAdEasyシステムによって首尾よく構築し,組換えアデノウイルスをAd-LMP-1-GFPでトランスフェクションした後に,LMP-1遺伝子はBMSCsの骨芽細胞への分化を促進することができた。それは,β-カテニンシグナル分子によって機能する可能性がある。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 幹細胞 ,  in vitro実験 ,  ウェスタンブロット法 ,  *ヒト ,  *骨形成 ,  大腸菌 ,  骨芽細胞 ,  *タンパク質 ,  トランスフェクション ,  PCR法 ,  プラスミド ,  *アデノウイルス科 ,  相同組換
準シソーラス用語： βカテニン ,  アデノウイルスベクター , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： LIM mineralization protein-1 ,  Mesenchymal stem cells ,  Osteogenic activity ,  Gene transfect

分類 (1件)： 分子遺伝学一般  (EC02010J)

タイトルに関連する用語 (6件)： ヒト ,  ミネラル化 ,  蛋白質 ,  組換えアデノウイルス ,  骨形成 ,  分子機構