Sinorhizobium melilotiにおけるeGFP融合を導入するための転位を用いた細菌における蛋白質局在パターンを解析するためのツール【Powered by NICT】

Bednarz Hanna; Bednarz Hanna; Niehaus Karsten; Niehaus Karsten

文献

J-GLOBAL ID：201702261413772640 整理番号：17A1457298

Sinorhizobium melilotiにおけるeGFP融合を導入するための転位を用いた細菌における蛋白質局在パターンを解析するためのツール【Powered by NICT】

Using transposition to introduce eGFP fusions in Sinorhizobium meliloti: A tool to analyze protein localization patterns in bacteria

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資料名：
巻： 257 ページ： 139-149 発行年： 2017年
JST資料番号： A0456C ISSN： 0168-1656 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：オランダ (NLD) 言語：英語 (EN)

原核生物における細胞内蛋白質局在性とそれらの空間的時間的動力学のin vivo分析に使用される従来方法は,関心のある蛋白質とN(アミノ)-の工学的または蛍光蛋白質のC(カルボキシ)末端融合のどちらかに基づいており,タグ組込用の内部サイトを調べる関与している。さらに,蛍光融合蛋白質の発現のための誘導または構成的プロモーターの使用は,局在化アーチファクトの過剰発現と結果につながる可能性がある。ここでは,転移性遺伝要素を用いた蛍光融合蛋白質の合成,ランダムに内因性レベルで発現させた全長蛍光融合蛋白質を産生する蛋白質コード配列の内部断面における統合の方法を記述した。確立した方法は,土壌細菌と植物共生体Sinorhizobium melilotiにおける蛋白質の細胞内局在を検討するために使用した。増強緑色蛍光蛋白質(eGFP)の転位ベース挿入と同様に,完全長蛋白質の生産のための選択マーカーのin vivo除去のための二種類の構築物を作成した。S.meliloti中の転位のpHB14プラスミドと誘導との結合は0.8%の転位効率と蛍光マーカーを持つ約3.22×10~4接合完了体コロニーを形成した。多様な機能,eGFPに融合の十六の無作為に標的蛋白質は,落射蛍光顕微鏡法による生きた細胞で同定され,分析し,蛍光蛋白質の大規模な,ランダム生産と原核生物細胞内の異なる局在とこれらの蛋白質の追従のための新しいツールの適合性を実証した。Copyright 2017 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【Powered by NICT】

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著者キーワード (4件)： , , ,

生化学的分析法 , 生体の顕微鏡観察法 , 蛋白質・ペプチド一般 , 生物学的機能 , 細胞生理一般

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