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J-GLOBAL ID：201702263736968835   整理番号：17A1928653

MTBのミトコンドリア翻訳は,昆虫細胞における28蛋白質の発現と精製を制御する。【JST・京大機械翻訳】

Expression and purification of the MTC 28 protein in insect cells

著者 (7件)： Zhuo Wenji (广東省結核病控制中心, 广州,510630) ,  Liu Zhihui (广州市胸科医院肺部疾病研究所) ,  Zhou Lin (广東省結核病控制中心, 广州,510630) ,  Chen Yanmei (广東省結核病控制中心, 广州,510630) ,  Chen Tao (广東省結核病控制中心, 广州,510630) ,  Sun Qi (广東省結核病控制中心, 广州,510630) ,  Guo Huixin (广東省結核病控制中心, 广州,510630)
資料名： Zhongguo Fang Lao Zazhi  (Zhongguo Fang Lao Zazhi)
巻： 39  号： 8  ページ： 898-901  発行年： 2017年 
JST資料番号： C3680A  ISSN： 1000-6621  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： MTBのミトコンドリア翻訳制御(mitochondrial translation control、MTC)タンパク質MTC28遺伝子をクローニングし、真核細胞発現プラスミドを構築し、昆虫細胞においてMTC28タンパク質を発現させた。PCR法を用いてMTB H37Rvの標準株のゲノムからMTC28遺伝子断片を増幅し、MTC28遺伝子断片とプラスミドpFastbac1をEcoRIとXhoIでダブル酵素消化し、T4 DNHリガーゼを連結させた。組換えプラスミドpFastbac1-MTC28を構築し、DH5α感受性菌にトランスフェクションし、アンピシリンを含む溶菌肉(lysogeny broth、LB)固体培地で陽性クローンをスクリーニングした。成長したコロニーを選択し、アンピシリンを含む液体LB培地において細菌のクローンを行い、PCRにより標的遺伝子をプラスミドに挿入した後に、PCRを行い、標的遺伝子の同定を行った。プラスミドpFastbac1-MTC28を,pFastbac1-MTC28プラスミドによって,DH10Bac受容体に形質移入し,組換えバキュロウイルス(Bacmid-MTC28)を構築するために,組換え型プラスミドを,プラスミドによって形質移入した。 plebac1-MTC28プラスミドを,組換え型プラスミドによって構築した(Bacmid-MTC28)。ゲンタマイシン,カナマイシンとテトラサイクリンを含む液体LB培地を用いて,細菌コロニーをスクリーニングし,PCRにより陽性コロニーをスクリーニングし,PCR法により陽性の細菌を同定し,Bacmid-MTC28の抽出を行った。組換え型プラスミド(Bacmid-MTC28)をリポフェクタミンによりsf9昆虫細胞にトランスフェクトし,組換えバキュロウイルスを発現させ,蛋白質を発現させた。結果:MTC28真核生物発現プラスミドの構築に成功し、バキュロウイルス発現MTC28タンパク質の発現システムを構築し、MTC28タンパク質を発現させ、精製により高純度かつ均一化したMTC28タンパク質を得た。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： コロニー ,  *タンパク質 ,  バキュロウイルス科 ,  トランスフェクション ,  酵素的分解 ,  受容体 ,  *ミトコンドリア ,  プラスミド ,  細菌 ,  ゲノム ,  PCR法 ,  クローン ,  エノール ,  芳香族ケトン ,  フェノール類 ,  カルボアミド ,  エノン ,  芳香族縮合化合物 ,  アミノアルコール ,  ケト酸 ,  ジケトン ,  第三アミン ,  ヒドロキシ酸 ,  ヒドロキシケトン ,  ポリオール ,  アミノ酸 ,  芳香族化合物 ,  ラクタム ,  硫黄複素環化合物 ,  第一アミン
準シソーラス用語： *昆虫細胞 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (7件)： Mycobacterium tuberculosis ,  Mitochondrial proteins ,  Genes ,  mitochondrial ,  Transfection ,  Plasmid ,  Insect cells

分類 (1件)： 遺伝子操作  (EC02050B)

物質索引 (2件)： テトラサイクリン ,  アンピシリン

タイトルに関連する用語 (6件)： ミトコンドリア ,  翻訳 ,  昆虫細胞 ,  蛋白質 ,  発現 ,  精製