抄録/ポイント:
抄録/ポイント
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背景:神経幹細胞は近年の神経科学研究の焦点となり、神経系損傷治療において広い応用前景があるが、大量に純化され、特徴が均一な終末神経細胞を如何に獲得するかはこの領域の難点である。細胞内蛍光レポーターシステムを用いて神経幹細胞分化の過程を追跡し、純化した単一タイプの終末神経細胞を獲得することはこの難題の解決に対して実行可能な方案を提供した。目的;星状細胞の特異的マーカーであるGFAP遺伝子を持つプロモーターにより駆動される蛍光レポーターシステムの神経幹細胞神経分化の追跡における価値を検討する。方法;マウス胚の大脳皮質を分離し、機械的消化と吹き付け後の懸濁培養を行い、免疫蛍光染色によりその特異的マーカーNestinの発現を測定し、神経幹細胞を確定した。さらに,pLV/Final-neo-GFAP(promoter)-dTomatoベクターを持つレンチウイルスをマウス神経幹細胞に感染させ,G418を用いて14日後に神経幹細胞を精製し,星状細胞に分化させた。細胞の赤色蛍光(dTomato)の変化を顕微鏡で観察した。誘導後13日目に細胞免疫蛍光技術を用いて赤色蛍光を発現する細胞に対してGFAP抗体の複合染色を行った。結果と結論;(1)神経幹細胞は,Nestinの発現を示した。(2)レンチウイルスを感染させ、14日後にG418抵抗性を有する純化神経幹細胞を得た。(3)神経細胞による分化誘導後,顕微鏡下で赤色蛍光の大量発現が観察され,GFAPの染色は赤色蛍光と非常に高い一致性を示した。(4)in vitroでGFAP-GFAP(promoter)-dTomatoベクターを発現するマウス神経幹細胞を成功裏に獲得し、この細胞はin vitroでGFAP遺伝子の特異的発現を追跡することができる。それは,神経幹細胞の方向性神経分化機構,細胞移植,および組織工学製品開発の研究のための強力なツールを提供する。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】