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J-GLOBAL ID：201702268745877064   整理番号：17A1579797

hTERT-P2A-EGFP遺伝子を含む真核生物発現プラスミドの構築と同定を行った。【JST・京大機械翻訳】

Construction and identification of eukaryotic expression plasmid carrying hTERT-P2A-EGFP

著者 (7件)： Chen Xiaona (吉林大学公共衛生学院営養与食品衛生学教研室,吉林 長春,130021) ,  Wang Xiaodan (吉林大学第一医院転化医学研究院,吉林 長春 130061;吉林大学免疫学研究所,吉林 長春 130061) ,  Sun Liguang (吉林大学第一医院転化医学研究院,吉林 長春 130061;吉林大学免疫学研究所,吉林 長春 130061) ,  Fang Fang (吉林大学公共衛生学院営養与食品衛生学教研室,吉林 長春,130021) ,  Cui Weiwei (吉林大学公共衛生学院営養与食品衛生学教研室,吉林 長春,130021) ,  Yang Yongguang (吉林大学第一医院転化医学研究院,吉林 長春 130061;吉林大学免疫学研究所,吉林 長春 130061) ,  Liu Ya (吉林大学公共衛生学院営養与食品衛生学教研室,吉林 長春,130021)
資料名： Jilin Daxue Xuebao. Yixue Ban  (Jilin Daxue Xuebao. Yixue Ban)
巻： 43  号： 2  ページ： 213-219,Inside Front Cover  発行年： 2017年 
JST資料番号： C2934A  ISSN： 1671-587X  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 目的;真核生物発現プラスミドhTERT-P2A-EGFPを構築し、HEK293FT細胞における発現とトランスフェクション効率を検討した。方法;組換え型プラスミドを,pBABE-po-hTERTとpRRLSIN-cPPT-MSCV-EGFPプラスミドによって構築した。PCR法により,hTERT,P2AおよびEGFP遺伝子を得て,RT-PCR法によってhTERT-P2A-EGFPを得た。真核生物発現ベクターpRRLSIN-cPPT-MSCV-EGFPによって切断された後に,hTERT-P2A-EGFP遺伝子を含む組換え型プラスミドを得た。リポフェクタミン仲介組換えプラスミドをHEK293FT細胞にトランスフェクションし、蛍光顕微鏡により緑色蛍光タンパク質(GFP)の細胞中の発現を観察した。結果;hTERT,P2A,およびEGFPのフラグメントの長さは,それぞれ,400,110および720bpであったことが,PCRによって検出された。酵素消化後の標的遺伝子断片hTERT-P2A-EGFPは約4300bpであった。配列分析により,標的遺伝子の547遺伝子座が突然変異したことが示された。突然変異技術を用いて突然変異を誘発し、再配列後の目的遺伝子配列はGenBankに公表されている遺伝子配列と完全に一致した。組換えプラスミドをHEK293FT細胞にトランスフェクションした後、蛍光顕微鏡下でGFPを観察できた。フローサイトメトリーにより,HEK293FT細胞のトランスフェクション効率は44.8%であることが示された。結論;【目的】組換えプラスミドを首尾よく構築し,細胞形質移入のために用いることができるhTERT-P2A-EGFPの組換え型プラスミドを構築することに成功した。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 緑色蛍光タンパク質 ,  突然変異 ,  *真核生物 ,  フローサイトメトリー ,  酵素的分解 ,  PCR法 ,  *遺伝子 ,  トランスフェクション ,  *プラスミド ,  蛍光顕微鏡 ,  RT-PCR法 ,  標的遺伝子 ,  *EGFP遺伝子 ,  *hTERT ,  *強化緑色蛍光タンパク質 ,  タンパク質 ,  *生物
準シソーラス用語： *EGFP , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (3件)： human telomerase reverse transcriptase ,  green fluorescence protein ,  plasmid construction

分類 (1件)： 遺伝子操作  (EC02050B)

タイトルに関連する用語 (5件)： 真核生物 ,  発現 ,  プラスミド ,  構築 ,  同定