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J-GLOBAL ID：201702269901452251   整理番号：17A1655890

大腸菌におけるArabidopsis thalianaの遺伝子発現の最適化及び酵素的性質の解析【JST・京大機械翻訳】

Efficient Expression of Hydroxynitrile Lyase from Arabidopsis Thaliana in Escherichia Coli and Analysis of Recombinant Hydroxynitrile Lyase En-zymetic Proerties

著者 (4件)： Mou Jiang (浙江中医薬大学 杭州 310053) ,  Lin Jinghong (杭州師范大学) ,  Pei Xiaolin (杭州師范大学) ,  Yu Bing (浙江中医薬大学 杭州 310053)
資料名： Zhejiang Zhongyiyao Daxue Xuebao  (Zhejiang Zhongyiyao Daxue Xuebao)
巻： 41  号： 5  ページ： 408-415  発行年： 2017年 
JST資料番号： C3523A  ISSN： 1005-5509  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】大腸菌(Escherichia coli)における組換え型ニトリルヒドラターゼの発現を最適化し,その酵素的性質を研究する。[方法]コドンの選択性に基づき、シロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana)のニトリルヒドラーゼ遺伝子にコドン最適化を行い、この遺伝子を発現ベクターpET-28a(+)にクローニングし、組換えプラスミドpET-28a(+)-HNL-Atを構築した。単一因子法を用いて発現過程を最適化し、Niカラムによるアフィニティークロマトグラフィーにより、目的タンパク質を精製し、紫外蛍光光度法により酵素学的性質を調べた。[結果]IPTG誘導により,大腸菌におけるArabidopsis thalianaからの組換え型発現を成功裏に達成し,誘導条件を最適化した後,発酵液中の組換え酵素活性は29.3U・mL-1に達し,最適化前より68%高かった。Ni-NTAアフィニティークロマトグラフィーにより精製した蛋白質をSDS-PAGEにより精製し,組換蛋白質の相対分子量はSDS-PAGEにより約30kDaであることを示した。酵素的性質の分析により,最適反応pHは5で,最適反応温度は30°Cで,比活性は213.9U・mg-1であった。[結論]大腸菌における組換え型ニトリルヒドラターゼの効率的な発現を実現し、最適化プロセスは簡単で実行可能で、酵素学的性質の正確性を示し、更なる酵素法によりキラルなシアンアルコール類化合物を調製するための基礎を築いた。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *遺伝子 ,  *遺伝子発現 ,  *酵素 ,  ニッケル ,  SDS-PAGE ,  プラスミド ,  組換タンパク質 ,  アフィニティークロマトグラフィー ,  *Arabidopsis thaliana ,  コドン ,  *最適化 ,  *大腸菌
準シソーラス用語： 発現ベクター ,  ニトリルヒドラターゼ ,  組換体 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： Arabidopsis thaliana ,  Hydroxynitrile lyase ,  Escherichia coli ,  expression optimization ,  enzymetic properties

分類 (2件)： 遺伝子発現  (EC02040Q) ,  酵素一般  (EB09010D)

タイトルに関連する用語 (7件)： 大腸菌 ,  Arabidopsis ,  遺伝子発現 ,  最適化 ,  酵素 ,  性質 ,  解析