抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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目的:着床前の胚は酸化ストレスに敏感であり、低酸素状態は胚の生長と発育に有利である。本論文では、過酸化水素(H2O2)が脱落膜化マウスの子宮内膜間質細胞(ESCs)に与える影響を検討し、脱落膜化マウスESCsの酸化ストレスモデルを構築する。【方法】ESCsを,酵素的加水分解とメッシュ濾過によって分離し,そして,差次的付着法によって培養した。実験は,4つの群(n=8)に分けた。ブランク対照群は,基礎培地を含むマウス子宮内膜間質細胞(ESCs)であった。脱落膜群;基礎培地に10 nmol/L E2、1μmol/L P4を加えて、マウスのESCs脱落膜化72時間を誘導した。陰性対照群;マウスESCsの脱落膜化誘導に成功した後、基礎培地のみで4時間介入した。酸化ストレス群;マウスのESCs脱落膜を誘導することに成功した後、それぞれ50,100,150,200,250,300μmol/LのH2O2を含む基礎培地を4時間持続させた。免疫組織化学法によりVimentin、Cytokeratinの発現を測定し、初代マウスESCsを同定し、RT-PCRによりdPRP mRNAの発現を測定し、ESCs脱落膜を測定し、CCK-8法によりH2O2介入後の細胞増殖と増殖活性を測定した。フローサイトメトリーにより細胞内ROSレベルを測定し、酸化ストレスの程度を判断した。結果:ESCsは,成功裏に分離され,培養され,同定された。顕微鏡下で細胞は紡錘状と多角形、放射状の配列を呈した。細胞免疫蛍光染色により,Vimentin(+),Cytokeratin(-),ESCSの純度が(96.3±0.49)%,10nmol/L E2,1μmol/L P4により影響されることを示した。脱落膜群における脱落膜マーカーのdPRP mRNA発現は,ブランク対照群におけるそれより有意に高かった(1.0010±0.0011対0.0002±0.0000,P<0.01)。陰性対照群における抑制率[(1.000±0.000)%]と比較して,統計的有意差が認められた(P<0.01)。H_2O_2濃度が50,100,150,200,250,300μmol/Lのとき,酸化ストレス群における抑制率は,それぞれ(0.013±0.004,0.032±0.007,0.069±0.023,0.172±0.007,0.395±0.018,0.706±0.013)%であった。それらの間で,150,200,250,300μmol/LのH2O2は,陰性対照群と比較して有意差があった(P<0.05)。さらに,50,100μmol/LのH2O2で処理した細胞のROSレベルは,陰性対照群のそれより有意に高かった(27.77±4.20対17.47±0.61,43.57±6.58対17.47±0.61,P=0.001)。結論:50,100μmol/LのH2O2は脱落膜化マウスのESCsの成長と増殖に影響を与えず,H2O2濃度の増加により,ROSの産生を増加させることができる。100μmol/LのH2O2は脱落膜化マウスのESCsの酸化ストレスモデルの確立に適した刺激濃度として用いることができる。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】
