シス反応素子をスクリーニングするためのレンチウイルスプロモーターレポーターベクターライブラリーの構築【JST・京大機械翻訳】

Zhou Xueying; Cao Tiesheng; Liu Xiangwei; Wei Mengying; Yang Guodong; Yuan Lijun

文献

J-GLOBAL ID：201702273648177426 整理番号：17A1327005

シス反応素子をスクリーニングするためのレンチウイルスプロモーターレポーターベクターライブラリーの構築【JST・京大機械翻訳】

Construction of lentivirus based promoter reporter random library for screening context dependent cis-elements

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資料名：
巻： 29 号： 4 ページ： 455-461 発行年： 2017年
JST資料番号： C3913A ISSN： 1672-3511 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：中国 (CHN) 言語：中国語 (ZH)

目的:ランダム配列とminiCMV融合を含むプロモーターを確立し、抗生物質耐性遺伝子の発現を駆動する。異なる処理条件下での反応性素子のスクリーニングと探索のために用いた。【方法】Puromycin抵抗性遺伝子,すなわち,ホスホマイシンN-アセチルトランスフェラーゼ遺伝子(puromycin-N-acetyltransferase gene,PAC)のプライマーを設計した。標的遺伝子を増幅し,PacI+Pme1制限酵素により標的ベクターpWPIにクローン化した。次に,結合配列+20Nのランダム配列+miniCMVの融合断片を設計し,合成し,PCRにより二本鎖配列を得て,酵素消化を行い,Cla1+PacIにより前述のpWPI-PACベクターにクローニングした。クローン化されたベクターの組合せは,レンチウイルス反応素子のためのレポーターライブラリーをスクリーニングするために使用された。これらに基づき、著者らはベクターライブラリーを細胞にトランスフェクションし、超音波照射を行った。超音波照射量は10min、100mW/cm2であった。1日1回、1日3回照射した。超音波照射後、細胞に対してpuromycin処理を行い、4日後に、超音波照射による生存細胞を収集し、DNAを抽出し、PCRにより20Nを含む配列を増幅し、配列決定を行った。結果:著者らはライブラリー構築案を設計し、20Nランダム配列+miniCMV +Puromycin抵抗性遺伝子のライブラリーを構築した。このライブラリーを細胞にトランスフェクションすると、超音波照射後にトランスフェクションにより、超音波反応性クローン細胞における抵抗性遺伝子の発現を増加させることができる。著者らはPuromycin処理後の生存細胞を獲得することにより、潜在的な超音波反応に対する調節要素を発見した。結論:著者らが構築した20Nランダムシーケンス+miniCMV+Puromycin抵抗性遺伝子ライブラリーは、超音波などの特定条件に対して発現調節反応を有するシス反応エレメントをスクリーニングするのに用いることができる。これらの結果は,遺伝子発現制御のための基礎を提供することができた。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

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抗生物質一般 , その他の汚染原因物質 , 下水,廃水の生物学的処理 , 遺伝子の構造と化学 , 微生物学(ウイルス以外)一般

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