文献

J-GLOBAL ID：201702274042765310   整理番号：17A1175372

分子クローニング,Brugia malayiホスホグリセリン酸キナーゼの精製と特性化【Powered by NICT】

Molecular cloning, purification and characterization of Brugia malayi phosphoglycerate kinase

著者 (4件)： Kumar Ranjeet (Department of Biochemistry, Institute of Science, Banaras Hindu University, Varanasi 221005, India) ,  Doharey Pawan Kumar (Division of Biochemistry, CSIR - Central Drug Research Institute, Lucknow 226001, India) ,  Saxena Jitendra Kumar (Division of Biochemistry, CSIR - Central Drug Research Institute, Lucknow 226001, India) ,  Rathaur Sushma (Department of Biochemistry, Institute of Science, Banaras Hindu University, Varanasi 221005, India)
資料名： Protein Expression and Purification  (Protein Expression and Purification)
巻： 132  ページ： 152-163  発行年： 2017年 
JST資料番号： W0282A  ISSN： 1046-5928  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： ホスホグリセリン酸キナーゼ(PGK)は多くの寄生虫に存在する解糖系酵素である。は薬物とワクチン開発のための候補分子として報告されている。本研究では,1.3kbのオープンリーディングフレームを持つマレー糸状虫(Brugia malayi)3-ホスホグリセリン酸キナーゼ(BmPGK)をコードする全長c DNAを分離し,PCRを増幅し,クローニングした。BmPGKのORFの正確なサイズは1377bpsである。BmPGK遺伝子はpET-28a(+)発現ベクターにサブクローニングし,発現した酵素はアフィニティーカラムで精製し,特性化した。SDS-PAGE分析は,~45kDaと組換えBrugia malayi3-ホスホグリセリン酸キナーゼ(rBmPGK)の天然分子量を明らかにした。酵素は温度およびpHに敏感であることが分った,25°CおよびpH=8.5で最大活性を示した。PGAとATPに対するK_値は1.77及び0.967mMであった。PGK阻害剤,クロルスロンと抗フィラリア薬はアルベンダゾールとイベルメクチンは酵素を阻害した。クロルスロン,PGKの特異的阻害剤は酵素を阻害したK_値は1.88μMと競合。アルベンダゾールもPGKを競合的に阻害し,値は35.39μMであった。さらにこれらの阻害研究は,酵素と薬物のドッキングおよび分子シミュレーションにより確認した。クロルスロンはグルタミン37と同様にADP結合部位でのアスパラギン酸385とバリン387のヒンジ領域における基質結合部位と相互作用した。一方アルベンダゾールはアスパラギン335残基と相互作用した。これらの効果は,結合相互作用と良く関連した。このように本研究では,この新規薬物標的のための効果的な阻害剤の設計と合成を助け,強力な駆虫薬との相互作用のモードを理解する可能性がある。Copyright 2017 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【Powered by NICT】

シソーラス用語： *キャラクタリゼーション ,  *Brugia ,  *遺伝子クローニング ,  相互作用 ,  遺伝子 ,  寄生虫 ,  結合部位 ,  分子量 ,  *ホスホグリセリン酸キナーゼ ,  DNA【核酸】 ,  SDS-PAGE ,  スルフィド ,  窒素複素環化合物 ,  カルバミド酸エステル ,  芳香族縮合化合物 ,  芳香族アミン ,  スルホンアミド ,  有機塩素化合物 ,  オレフィン化合物
準シソーラス用語： *クローニング ,  *マレー糸状虫 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： ホスホグリセリン酸キナーゼ ,  Brugia malayi ,  リンパフィラリア症 ,  薬物標的 ,  クロルスロン

分類 (2件)： 酵素一般  (EB09010D) ,  遺伝子操作  (EC02050B)

物質索引 (2件)： アルベンダゾール ,  クロルスロン

タイトルに関連する用語 (5件)： 分子クローニング ,  Brugia ,  ホスホグリセリン酸キナーゼ ,  精製 ,  特性化