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J-GLOBAL ID：201702274863346317   整理番号：17A1663401

シロイヌナズナにおけるMg2+輸送体AtMGT10の原核発現とポリクローナル抗体調製【JST・京大機械翻訳】

Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of magnesium transporter AtMGT10 in Arabidopsis thaliana

著者 (4件)： Zhou Yamei (西北農林科技大学生命科学学院,陜西楊凌,712100) ,  Liang Shuang (西北農林科技大学生命科学学院,陜西楊凌,712100) ,  Qi Yafei (西北農林科技大学生命科学学院,陜西楊凌,712100) ,  Liu Xiayan (西北農林科技大学生命科学学院,陜西楊凌,712100)
資料名： Xibei Nonglin Keji Daxue Xuebao(Zirankexueban)  (Xibei Nonglin Keji Daxue Xuebao(Zirankexueban))
巻： 45  号： 5  ページ： 168-174  発行年： 2017年 
JST資料番号： C5021A  ISSN： 1671-9387  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： [目的]本研究の目的は,大腸菌におけるArabidopsis thalianaの葉緑体のMg2+輸送体AtMGT10を発現させ,AtMGT10蛋白質に対するポリクローナル抗体を得ることであり,AtMGT10蛋白質の植物成長における機能を研究するための基礎を提供することである。[方法]AtMGT10遺伝子コード領域の187~786bpのcDNA断片をPCR法によりクローニングし,pET-28aに挿入し,原核生物発現ベクターpET-28a-AttT1063462を構築した。大腸菌BL21(DE3)株を形質転換し,Hisタグを持つHis-AMGMT1063-262の組換え蛋白質をIPTGにより誘導した。組換え型蛋白質をニッケル親和性精製後に抗原としてウサギに注射し,AtMGT10蛋白質に対するポリクローナル抗体を調製した。シロイヌナズナの野生型葉身の総蛋白を抽出し、AtMGT10の多抗血清を用いてタンパク質の免疫ブロット検査を行った。【結果】600bpのAtMGT10cDNAフラグメントをPCRによって増幅し,原核生物発現ベクターpET-28a-AttT1063-262を構築し,大腸菌においてHis-AtMGT1063-262蛋白質を発現させた。Anti-AtMGT10の抗血清を,精製と精製の後に,ウサギにおいて免疫化することによって,得ることができた。シロイヌナズナの野生型総蛋白質において、Anti-AtMGT10を用いて、約50kuのタンパク質バンドを検出し、抗原競合試験により、検出されたシグナルはシロイヌナズナの内因性AtMGT10タンパクであることが証明された。[結論]原核生物発現のHis-AtMGT1063-262蛋白質は,AtMGT10蛋白質に対する特異的なポリクローナル抗体を調製するのに成功した。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 遺伝子 ,  野生型 ,  葉緑体 ,  *Arabidopsis thaliana ,  形質転換 ,  *ポリクローナル抗体 ,  cDNA ,  PCR法 ,  組換タンパク質 ,  大腸菌 ,  タンパク質 ,  抗血清 ,  原核生物
準シソーラス用語： 原核生物発現 ,  発現ベクター , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： magnesium transporter ,  AtMGT10 ,  Arabidopsis thaliana ,  prokaryotic expression ,  antibody preparation

分類 (2件)： 遺伝子発現  (EC02040Q) ,  蛋白質・ペプチド一般  (EB03010N)

タイトルに関連する用語 (5件)： シロイヌナズナ ,  輸送体 ,  発現 ,  ポリクローナル抗体 ,  調製