文献

J-GLOBAL ID：201702280047455782   整理番号：17A1193248

生細胞中の光クリック化学を用いた発生期RNAの一時的標識

Temporal Labeling of Nascent RNA Using Photoclick Chemistry in Live Cells

著者 (6件)： NAINAR Sarah (Univ. California, California, USA) ,  KUBOTA Miles (Univ. California, California, USA) ,  MCNITT Christopher (Univ. Georgia, Georgia, USA) ,  TRAN Catherine (Univ. California, California, USA) ,  POPIK Vladimir V. (Univ. Georgia, Georgia, USA) ,  SPITALE Robert C. (Univ. California, California, USA)
資料名： Journal of the American Chemical Society  (Journal of the American Chemical Society)
巻： 139  号： 24  ページ： 8090-8093  発行年： 2017年06月21日 
JST資料番号： C0254A  ISSN： 0002-7863  CODEN： JACSAT  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 短報  発行国： アメリカ合衆国 (USA)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 金属を使用しない歪み促進光クリックアジド-アルキン環化付加(SPPAC)反応を,初めて細胞内での発生期アジド-修飾RNAのタグ付けのために応用した。化学合成シクロプロペノン-ケージ化オキサジベンゾシクロオクチン(フォト-ODIBO)ビオチンに波長350nmの紫外光を照射するとSPPAC反応性化学種を生成し,これは速やかに2′-アジドアデノシン(2′N₃-A)と速やかに付加物を形成した。この反応は紫外分光法により追跡することができた。フォト-ODIBOはチオール存在下であっても高度に安定であり,ODIBOよりも安定であった。HeLa細胞を2′N₃-Aにて処理して細胞中のRNAを代謝的に標識した後,全RNAを抽出し,アジド-RNAを分離して精製した。in vitroにてアジド-RNAとフォト-ODIBOを350nm光照射下で反応させた結果,短時間にてRNAはODIBOにより標識されることが分かった。このODIBO標識は,光照射無しあるいはODIBOを用いた場合には起こらなかった。また細胞内に豊富に生成するチオール源であるグルタチオンに匹敵するレドックス能を持つβ-メルカプトエタノールの存在下であってもチオール-介在アジド還元は起こらなかった。さらに,2′N₃-Aにて処理したHeLa細胞中でもRNAのフォト-ODIBOによる標識が可能なことを実験により確証した。このODIBO標識法は選択的光照射による細胞の蛍光イメージングやRNA富化に応用できる。

シソーラス用語： 細胞 ,  *画像分析 ,  *化学合成 ,  光化学反応 ,  *RNA【核酸】 ,  *蛍光標識 ,  環状付加 ,  *光環状付加 ,  紫外線照射 ,  分光分析 ,  HeLa細胞 ,  in vitro実験 ,  in vivo実験 ,  酸化還元反応 ,  *蛍光測定 ,  RT-PCR法 ,  脂肪族アルコール ,  チオール ,  脂肪族アミン ,  脂肪族カルボン酸 ,  トリペプチド ,  含硫アミノ酸 ,  シクロアルキン ,  カルボン酸 ,  窒素複素環化合物 ,  ビタミンB群 ,  ウレア化合物 ,  硫黄複素環化合物
準シソーラス用語： HeLa株細胞 ,  in vitro研究 ,  in vivo試験 ,  RT-PCR ,  *クリック化学 ,  レドックス特性 ,  環化付加 ,  *蛍光イメージング ,  蛍光性標識 ,  光化学的反応 ,  *光環化付加 ,  紫外光照射 ,  紫外分光法 ,  生細胞 ,  *生細胞イメージング

分類 (5件)： 有機化合物・錯体の蛍光・りん光(分子)  (BH06062I) ,  生物物理的研究法  (EA03020V) ,  細胞構成体の機能  (EF03060C) ,  付加反応,脱離反応  (CF02030M) ,  光化学反応,ラジカル反応  (CF02090A)

物質索引 (5件)： 2′-アジドアデノシン ,  β-メルカプトエタノール ,  グルタチオン ,  シクロオクチン ,  ビオチン

タイトルに関連する用語 (4件)： 生細胞 ,  クリック化学 ,  RNA ,  標識